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原文传递用于定量蛋白质组学的低能量可切割质量标记

专利名称：	用于定量蛋白质组学的低能量可切割质量标记
摘要：	本发明涉及一种化合物，该化合物包含或由以下组成：(a)反应性部分或，所述反应性部分能够与肽的官能团反应形成共价键；以及与之共价连接的(b)部分，该部分在质谱仪(i)中以低于碎裂肽所需的能量和/或比肽更高的转化率碎裂；以及(ii)在根据(i)的所述能量下，并且当通过所述反应基团与肽偶联时，在与肽偶联的所述化合物内的单个位点产生第一部分和第二部分，所述第二部分偶联所述肽。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	德国;DE
申请人：	马克斯-普朗克科学促进学会
发明人：	F·迈斯纳;M·曼;F·迈尔;S·比雷拉温特;A·齐兴林斯基
专利状态：	有效
申请日期：	2017-11-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-27T00:00:00+0800
申请号：	CN201780083266.9
公开号：	CN110178033A
代理机构：	永新专利商标代理有限公司
代理人：	过晓东
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	德国慕尼黑
主权项：	1.包含以下部分或由以下部分组成的化合物： (a)反应性部分，所述反应性部分能够与肽的官能团反应形成共价键；以及与其共价连接 (b)在质谱仪中碎裂的部分， (i)其在低于碎裂肽所需能量的能量下和/或以比肽更高的转化率在质谱仪中碎裂；和 (ii)其在根据(i)的所述能量下并且当通过所述反应基团与肽偶联时，在与肽偶联的所述化合物内的单个位点处碎裂，产生第一部分和第二部分，所述第二部分与所述肽偶联。 2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物是同位素标记的并且优选包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个同位素标记的原子，同位素标记的原子优选为13C和/或15N。 3.根据权利要求1-3之一所述的化合物，其中所述化合物包含式(I)的部分， -X-CH2-(Y)n-Z- (I) 其中 X为SCH3、SO或SO2； Y为CH2、NH或O，条件是(Y)n包含0或1个选自NH和O的基团； n是0、1、2、3、4、5、6、7或8，优选是0或1；以及 Z为CHA-Y或CH2-CO，其中A是吸电子基团，优选为NO2或卤素，如F，其中所述部分优选是-SO-(CH2)2-CO-。 4.化合物，优选根据前述任一权利要求所述的化合物，其中所述化合物具有式(II)： B1-式(I)-B2-D (II) 其中 B1和B2是适合多重同位素标记的部分，所述同位素标记优选位于C原子处； D是如权利要求1所定义的反应性部分；或其盐或溶剂化物，或在适用的范围内的互变异构体、对映异构体、非对映异构体、外消旋体或其混合物。 5.根据权利要求4所述的化合物，其中B1由式(IIIa)或(IIIb)定义， H3C-(Y)m-E-(Y)p (IIIa) 或 K-CH2-(Y)m-E-(Y)p (IIIb) 其中 E为O-CO、N-CO、S-CO、O-CS、S-CS、(CH2)2或NH-CO； Y如权利要求3中所定义或为CH(CH3)； m为1、2或3；和 p为1、2或3； K为富集部分；其中B1优选地为CH3-CH2-O-CO-CH2、CH3-CH2-NH-CO-CH2、CH3-CH(CH3)-O-CO-CH2或CH3-CH(CH3)-NH-CO-CH2；和/或 B2由式(IVa)、(IVb)或(IVc)定义， NR1-(CH2)q-G (IVa) CHR1-(CH2)q-G (IVb) 或 OR1-(CH2)q-G (IVc) 其中 R1是H、C1-C4烷基、或环烷基，如环戊基和环己基； G是在所需程度上连接B2至所述反应性基团D的官能团； q为1、2、3、4、5、6、7或8，优选为1；其中B2优选为NH-CH2-CO。 6.根据权利要求4或5所述的化合物，其中所述化合物 (a)为同位素标记的，其中同位素标记存在于B1、式(I)和B2中的一个、多个或全部中；和/或 (b)具有式(Va)或(Vb)：其中R2是氢或吸电子基团，如卤素、NH3+、NR3R4R5+或NO2，其中R3、R4和R5独立地为C1-C6烷基或环烷基、C2-C6链烯基或环烯基或C2-C6炔基； J为适合同位素标记并含有C且任选包含N和/或O的部分；优选为取代或未取代的C1-C6烷基或环烷基、取代或未取代的C2-C6链烯基或环烯基、或取代或未取代的C2-C6炔基，其中1或2个碳原子可被选自O、N、S和P的杂原子取代，取代基包括OH、卤素、甲基和甲氧基；J最优选地为H3C-(CH2)r-O； n是0到19的整数；和 r是0到20的整数；其中 R2为吸电子基团，如卤素、NH3+、NR3R4R5+或NO2，其中R3、R4和R5各自独立地为C1-C6烷基或环烷基、C2-C6链烯基或环烯基或C2-C6炔基； r和t独立地为1到20的整数。 7.根据权利要求1-6之一所述的化合物，其中所述第一部分不带电。 8.第二化合物，其选自 (a)一种肽，该肽携带一种或多种根据权利要求1至7之一所定义的化合物；和 (b)通过使如权利要求4所定义的式(I)中的X和CH2之间的键碎裂而从(a)的化合物获得的一个或多个互补部分，其中所述互补部分由所述肽和第二部分组成或包含所述肽和第二部分。 9.第一部分，所述第一部分通过使如权利要求3所定义的式(I)中的X和CH2之间的键碎裂而从权利要求4所定义的式(II)的化合物获得，其中所述第一部分包含B1。 10.一种试剂盒，其包含权利要求1至7之一的多种化合物或由其组成，其中所述化合物在化学上是相同的但具有不同的同位素标记。 11.根据权利要求10所述的试剂盒，其中所述第二部分在其精确质量方面和任选地在其标称质量方面是不同的。 12.根据权利要求1至8之一所定义的化合物或权利要求10或11所述的试剂盒用于同量异序标记的用途。 13.一种进行质谱分析的方法，所述方法包括： (a)使肽与权利要求1至8之一所定义的化合物反应，得到化合物-肽缀合物； (b)电离(a)的结果；以及 (c)执行以下之一个或两个： (i)以所述缀合物在所述化合物内的单个位点处优先碎裂的能量碎裂(b)的结果；和 (ii)以碎裂所述化合物和所述肽二者的能量碎裂(b)的结果；其中，在(i)和(ii)都进行的程度时，它们同时进行或以任何顺序相继进行。 14.一种量化肽的方法，所述方法包括权利要求13的方法和另外的以下步骤： (d)从(c)(i)中获得的碎片的量和/或(c)(ii)中获得的碎片的量确定给定肽的量。 15.一种制备用于质谱分析的样品的方法，所述样品包含蛋白质、多肽和/或肽，且所述方法包括： (a)任选地对所述样品进行蛋白水解消化，优选用胰蛋白酶进行；和 (b)使所述蛋白质、多肽和/或肽反应，或者在执行步骤(a)的情况下，使步骤(a)中获得的肽与权利要求1至7之一所定义的化合物反应。 16.至少一种根据权利要求1至7之一所定义的化合物用于通过质谱分析量化蛋白质、多肽和/或肽的用途。 17.根据权利要求1至7之一所定义的化合物用于在质谱分析中分离或富集肽的用途，所述分离或富集优选地基于中性丢失。 18.一种在质谱分析中分离或富集肽的方法，所述方法包括： (a)使肽与权利要求1至7之一所定义的化合物反应； (b)电离(a)的结果； (c)根据它们的m/z比分离(b)中得到的离子； (d)以使化合物碎裂但肽不碎裂的能量碎裂所述离子，优选通过使用等于或小于权利要求2中定义的值的归一化HCD碰撞能量来碎裂； (e)根据它们的m/z比分离(d)中得到的离子；以及 (f)分离与(c)的扫描相比表现出m/z偏移的那些(e)的离子，所述偏移对应于权利要求1中定义的第一部分，从而分离所述肽。 19.根据权利要求18所述的方法，其中，在离子被分离的程度上，进行这种分离，使得仅分离出12C离子，优选其通过以下方式实现： (i)选择给定同位素簇内的12C离子；和 (ii)使用不对称分离窗。 20.一种操作质谱仪的方法，所述方法包括分离离子，其中进行这种分离使得仅分离12C离子，优选其通过以下方式实现： (i)选择给定同位素簇内的12C离子；和 (ii)使用不对称分离窗。 21.一种操作包括检测器的质谱仪的方法，所述检测器优选是轨道阱检测器，所述方法包括在分析所述检测器中的碎片离子期间流逝的时间内，碎裂一种或多种其他前体离子。
所属类别：	发明专利