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原文传递狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法

专利名称：	狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法
摘要：	本发明公开了一种狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法。该方法，包括：首先用SDS‑PAGE法和TEM法对目标峰定性鉴定；然后用蛋白定量试剂盒测定标准品的浓度；将此标准品进行系列稀释，用凝胶色谱柱在色谱仪上检测标准品在280nm处的吸收峰，建立浓度和峰面积的线性回归方程；根据线性回归方程和待测样品的峰面积计算得到待测样品中的狂犬病毒灭活抗原浓度。本发明的方法可用于狂犬病毒生产的质量控制，具有快速、稳定、重复性好的优点，可指导疫苗的生产，对提高疫苗品质起到重要作用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中牧实业股份有限公司
发明人：	宋芳;李玲;李静;张文亮;李鹏宇;肖进;张蕾;董春娜;齐鹏;栗利芳;刘新月;巴利民;侯旭
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-24T00:00:00+0800
申请号：	CN201910570508.8
公开号：	CN110274982A
代理机构：	北京惟诚致远知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	王慧凤;李巍
分类号：	G01N30/88(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	100070 北京市丰台区南四环西路188号八区16-19号楼
主权项：	1.狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法，用于对待测样品中的狂犬病毒灭活抗原进行定量检测，其特征在于：包括下述步骤： (1)对目标峰进行定性鉴定 (2)待测样品进行离心澄清； (3)用蛋白定量试剂盒测定标准品中抗原浓度； (4)取标准品进行系列稀释，用高效液相色谱(HPLC)法进行检测，建立以峰面积为横坐标、浓度为纵坐标的线性回归方程； (5)对待测样品用步骤(4)所述的高效液相色谱(HPLC)法进行检测得到对应的峰面积； (6)根据线性回归方程及样品中狂犬抗原的峰面积计算得到待测样品中的狂犬病毒灭活抗原浓度；其中，(4)、(5)中所使用的高效液相色谱法使用的色谱柱为凝胶色谱柱，检测器为紫外检测器，其检测波长为280nm。 2.根据权利要求1所述的狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法，其特征在于：所述高效液相色谱法的流动相为含10mM磷酸氢二钠、40mM磷酸二氢钠和0.1M硫酸钠，pH为7.2的缓冲液。 3.根据权利要求2所述的狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法，其特征在于：所述流动相的流速为0.5-1.0ml/min，优选0.6ml/min。 4.根据权利要求2所述的狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法，其特征在于：所述进样量为50μl；所述狂犬病毒灭活抗原在色谱上的保留时间为19.9min。 5.根据权利要求2所述的狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法，其特征在于：所述凝胶色谱柱为Thermo Bio Basic SEC-1000或TSKgel G4000SWXL或TSKgel G6000 PWXL。 6.根据权利要求1所述的狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法，其特征在于：步骤(1)中，采用SDS-PAGE法、透射电子显微镜(TEM)法对目标峰进行定性鉴定。 7.根据权利要求1所述的狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法，其特征在于：步骤(2)中，所述待测样品选自含狂犬病毒灭活抗原的悬浮培养液、分离纯化液或抗原成品中的任意一种。 8.根据权利要求1所述的狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法，其特征在于：步骤(2)中，所述待测样品采用10000r/min离心5分钟进行澄清。 9.根据权利要求1所述的狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法，其特征在于：步骤(3)中，用Lorry法蛋白定量试剂盒测定标准品中抗原浓度。 10.根据权利要求1所述的狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法，其特征在于：步骤(4)中，取蛋白含量已被确定的狂犬病毒灭活抗原标准品进行系列稀释，并对稀释后的系列标准品进行色谱检测，建立以峰面积为横坐标、浓度为纵坐标的线性回归方程，R2应大于0.99。
所属类别：	发明专利