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原文传递一种柑橘黄龙病胶体金检测试纸条及其制备方法、试剂盒

专利名称：	一种柑橘黄龙病胶体金检测试纸条及其制备方法、试剂盒
摘要：	本发明提供了一种柑橘黄龙病胶体金检测试剂盒及制备方法，试纸条包括从加样端依次搭接在底板上的样品垫、金垫、NC膜、吸水纸，所述金垫上包被有胶体金标记的第一抗体，所述第一抗体为SDE‑1的单克隆抗体、SDE‑1的兔多克隆抗体或SDE‑1的鼠多克隆抗体，所述NC膜的检测线上包被有第二抗体，所述第二抗体为兔多克隆抗体或鼠多克隆抗体，质控线上包被有第三抗体，所述第三抗体为羊抗兔抗体、羊抗鼠抗体或羊抗大鼠抗体。本发明利用胶体金免疫层析技术，采用直接检验柑橘叶脉等简单易行方法，进而可以得出用于早期发现、早期诊断是否患有黄龙病的检测试剂盒，达到快速、准确、操作简便。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	天津;12
申请人：	南开大学
发明人：	郭宇;刘绮;李锦;宋欣;刘俊伟;汪颖;曹林
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-03T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-17T00:00:00+0800
申请号：	CN201910595549.2
公开号：	CN110244046A
代理机构：	天津企兴智财知识产权代理有限公司
代理人：	王雨杰
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	300071 天津市南开区卫津路94号
主权项：	1.一种柑橘黄龙病胶体金检测试纸条，其特征在于：包括从加样端依次搭接在底板上的样品垫、金垫、NC膜、吸水纸，所述金垫上包被有胶体金标记的第一抗体，所述第一抗体为SDE-1的单克隆抗体、SDE-1的兔多克隆抗体或SDE-1的鼠多克隆抗体，所述NC膜的检测线上包被有第二抗体，所述第二抗体为兔多克隆抗体或鼠多克隆抗体，质控线上包被有第三抗体，所述第三抗体为羊抗兔抗体、羊抗鼠抗体或羊抗大鼠抗体。 2.根据权利要求1所述的柑橘黄龙病胶体金检测试纸条，其特征在于：所述第一抗体的浓度为4-20ug/ml，优选为17ug/ml，所述第三抗体为的浓度为0.2-1mg/ml。 3.根据权利要求1所述的柑橘黄龙病胶体金检测试纸条，其特征在于：所述第二抗体为兔多克隆抗体，所述兔多克隆抗体的浓度为0.2-1.5mg/ml。 4.根据权利要求1所述的柑橘黄龙病胶体金检测试纸条，其特征在于：所述第二抗体为鼠多克隆抗体，所述鼠多克隆抗体的浓度为0.5-2mg/ml。 5.权利要求1-4所述的柑橘黄龙病胶体金检测试纸条的制备方法，其特征在于：包括如下步骤： (1)制备胶体金； (2)制备包被有胶体金标记的第一抗体的金垫； (3)制备包被抗原的NC膜：将第二抗体稀释液包被于检测线上，将第三抗体稀释液包被于质控线上； (4)将样品垫、金垫、NC膜、吸水纸依次粘附在底板上，斩切、组装后即得检测试纸条。 6.根据权利要求5所述的柑橘黄龙病胶体金检测试纸条的制备方法，其特征在于：所述胶体金的制备方法包括如下步骤：称取0.5-2.0g柠檬酸三钠加100ml超纯水，制成浓度为0.5-2.0％的柠檬酸三钠溶液；称取0.5-2.0g氯金酸和100ml超纯水，制成氯金酸溶液并在4℃下保存；称取氯金酸溶液1.0-4.0ml加入100ml超纯水用搅拌加热器加热至沸腾后，迅速加入柠檬酸三钠溶液2.0-6.0ml，继续搅拌加热3min，直至溶液由深灰色变成酒红色时取出，继续搅拌10min，冷却至室温，用超纯水定容至原体积100ml，用一次性滤膜过滤后，4℃保存备用。 7.根据权利要求5所述的柑橘黄龙病胶体金检测试纸条的制备方法，其特征在于：所述金垫的制备方法包括如下步骤：向pH值为7-9的胶体金中加入1-20μg的第一抗体，静置30min-60min后加入封闭物进行封闭，再次静置30min-60min，静置后以7000-12000的转速离心15min-60min收集沉淀，分别对获得的第一抗体的沉淀中加入复溶液对沉淀进行复溶，再将所得复溶的溶液混合，混匀后均匀铺在或喷在玻璃纤维素膜表面，真空冻干、真空抽干或烘干后，即得到包被有胶体金标记的第一抗体的金垫。 8.根据权利要求7所述的柑橘黄龙病胶体金检测试纸条的制备方法，其特征在于：所述复溶液按重量百分比计包括：0.1％-2％Tris、0％-2％PVP、0.1％-0.5％Tween-20、2％-20％蔗糖、0.1％-1％BSA，余量为水，优选地，所述复溶液的添加量为100-1000μL；优选地，所述封闭物为酪蛋白或质量分数为20％的BSA，优选地，所述胶体金的pH值通过向每1ml胶体金添加2-20μL 0.2M K2CO3溶液调整。 9.根据权利要求5所述的柑橘黄龙病胶体金检测试纸条的制备方法，其特征在于：所述NC膜的检测线上包被的第二抗体稀释液的制备方法包括如下步骤：将第二抗体用pH为7.0-8.0的碳酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液稀释即得到第二抗体的稀释液；所述NC膜的质控线上包被的第三抗体稀释液的制备方法包括如下步骤：将第三抗体使用pH为7.0-8.0的碳酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液稀释至即得到第三抗体的稀释液。 10.一种柑橘黄龙病胶体金检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求1-4任一所述的试纸条、刀片、加样滴管、第一溶液，所述第一溶液为PBS、PBS+0.1％～1％Triton-x100或PBS+0.1％～1％Tween20。
所属类别：	发明专利