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电喷雾萃取电离质谱法快速检测柑橘黄龙病的方法
| 专利名称： | 电喷雾萃取电离质谱法快速检测柑橘黄龙病的方法 |
| 摘要： | 本发明提供一种电喷雾萃取电离质谱法快速检测柑橘黄龙病的方法，借助电喷雾萃取电离质谱技术测定柑橘叶片代谢物变化，结合主成分分析方法，在PCR等常规检测方法难以有效检出感病苗木之前，鉴别出感染黄龙病潜伏期早期阶段的柑橘苗木。在实验室中，检测样本30次，检测效果达98％；田间试验阶段，检测样本100次，检测效果达90％，可以有效的快速检测柑橘黄龙病。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江西;36 |
| 申请人： | 南昌大学 |
| 发明人： | 罗丽萍;郝影宾;陈焕文;薛阿辉;刘永泉;崔萌;郭夏丽;吴栋 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-02-21T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-05-31T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910129821.8 |
| 公开号： | CN109828019A |
| 分类号： | G01N27/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N27 |
| 申请人地址： | 330000 江西省南昌市红谷滩新区学府大道999号 |
| 主权项： | 1.电喷雾萃取电离质谱法快速检测柑橘黄龙病的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)采集新鲜柑橘叶片，准确称取0.2000g样品，于液氮下研磨成粉，用植物DNA提取试剂盒提取DNA，PCR反应体系总体积为20μl； (2)PCR扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸40s，循环35次；72℃延伸10min； (3)琼脂糖凝胶电泳程序：采用1％琼脂糖制胶，电泳缓冲液为1×TBE buffer，120V恒压电泳30min，以DNA Ladder为DNA分子量标准；在凝胶成像系统下，观察，拍照保存； (4)准确称量脐橙叶鲜重0.20g，液氮下研磨成粉，加入70％甲醇2mL，超声辅助提取35min，4℃下10000×g离心10min，取上清，0.22μm滤膜过滤，待测； (5)采用线性离子阱质谱(LTQ-MS)为负离子模式测定，ESI源，质谱扫描范围m/z 50-1000；离子传输管温度150℃；ESI溶剂为甲醇；雾化气为氮气，压力为1.2MPa；ESI溶剂和样品流速分别为4、5μL/min；两喷雾口之间的距离1mm，夹角60°，距离质谱口5mm，角度为150°； (6)电喷雾萃取电离质谱法检测到的化合物定性通过比对实验得到的精确质量与NIST、Metlin和Pub Chem数据库中串联质谱信息及标准品谱图确定，使用Matlab软件进行主成分分析。 2.根据权利要求1所述的电喷雾萃取电离质谱法快速检测柑橘黄龙病的方法，其特征在于：步骤(1)中的PCR反应体系组成为：2×Mix10μl，模板DNA 1μg，CLas的16S rDNA特异引物Las606/LSS各1μl，双蒸水补足20μl。 3.根据权利要求1所述的电喷雾萃取电离质谱法快速检测柑橘黄龙病的方法，其特征在于：步骤(5)中测定时的实验条件为：萃取剂为甲醇，电喷雾电压3.5kV，母离子隔离窗口宽度设定为1.0Da，碰撞时间为30ms，碰撞能量15％-35％，其它参数由LTQ-MS软件系统自动优化。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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