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原文传递一种检测A、B亚群禽白血病病毒抗体的ELISA试剂盒及其应用

专利名称：	一种检测A、B亚群禽白血病病毒抗体的ELISA试剂盒及其应用
摘要：	本发明公开了一种检测A、B亚群禽白血病病毒抗体的ELISA试剂盒及其应用。包括包被截短表达的ALV‑A gp85蛋白以及截短表达的ALV‑B gp85蛋白的酶标板，其中，所述的截短表达的ALV‑A gp85蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的截短表达的ALV‑B gp85蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明利用截短表达的A、B亚群禽白血病病毒的gp85蛋白建立了A、B亚群禽白血病病毒的抗体间接ELISA检测方法，试验表明，该试剂盒用于检测A、B亚群禽白血病病毒抗体时，其敏感性与同类进口试剂盒相当，但特异性优于同类进口试剂盒，与J亚群禽白血病病毒抗体无交叉反应。本发明的提出为A、B亚群禽白血病病毒的检测和流行病学调查以及早期诊断提供了有效技术手段。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	黑龙江;23
申请人：	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
发明人：	高玉龙;崔红玉;张艳萍;高宏雷;王笑梅;祁小乐;潘青;王永强;刘长军;李凯;高立;王牟平
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-16T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201910406683.3
公开号：	CN110261599A
代理机构：	北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司
代理人：	孙皓晨;马鑫
分类号：	G01N33/535(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	150009 黑龙江省哈尔滨市南岗区马端街427号
主权项：	1.一种检测A、B亚群禽白血病病毒抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，包括包被截短表达的ALV-A gp85蛋白以及截短表达的ALV-B gp85蛋白的酶标板，其中，所述的截短表达的ALV-A gp85蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的截短表达的ALV-B gp85蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括HRP标记的兔抗鸡IgG、阳性对照、阴性对照、包被液、稀释液、显色液、洗涤液和终止液,优选的，所述阳性对照为A、B亚群禽白血病病毒阳性动物血清；所述阴性对照为健康动物血清；所述包被液为50g/L脱脂奶粉；所述稀释液为含有1％w/v牛血清白蛋白的PBST缓冲液；所述显色液为显色液TMB；所述洗涤液为PBST缓冲液；所述终止液为2M H2SO4。 3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒用于检测A、B亚群禽白血病病毒抗体时，具体的包括以下步骤： (1)包被截短表达的ALV-A gp85和截短表达的ALV-B gp85蛋白的酶标板4℃过夜后用洗涤液洗涤，37℃下用封闭液封闭1h，洗板； (2)加入对照和待测血清样品，37℃孵育，洗板； (3)加入HRP标记的兔抗鸡IgG，37℃孵育，洗板； (4)加入TMB显色液，37℃显色，最后加终止液终止反应，测定OD405nm值，当OD450nm值≥0.15时，判定为阳性。 4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，截短表达的ALV-A gp85和截短表达的ALV-B gp85包被比例为1：1，包被量各为1μg/ml，血清样品的稀释倍数为1:500，HRP标记的兔抗鸡IgG的稀释度为1:3000，血清样品、HRP标记的兔抗鸡IgG及TMB的作用时间分别为30min、30min和15min，封闭液为50g/L脱脂奶粉。 5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的截短表达的ALV-A gp85蛋白经由保藏编号为CGMCC NO.17419的稳定表达截短ALV-A gp85的293F细胞系表达、纯化后获得；所述的截短表达的ALV-B gp85蛋白经由保藏编号为CGMCC NO.17416的稳定表达截短ALV-Agp85的293F细胞系表达、纯化后获得。 6.权利要求1-5任一项所述的试剂盒在制备检测A、B亚群禽白血病病毒抗体试剂中的应用。 7.稳定表达截短ALV-A gp85的293F细胞系，其特征在于，命名为293F-ATgp85，该细胞系保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为CGMCCNO.17419；以及稳定表达截短ALV-B gp85的293F细胞系，其特征在于，命名为293F-BTgp85，该细胞系保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为CGMCCNO.17416。 8.一种截短表达的ALV-A gp85蛋白，其特征在于由权利要求7所述的稳定表达截短ALV-A gp85的293F细胞系表达产生，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；以及一种截短表达的ALV-B gp85蛋白，其特征在于由权利要求7所述的稳定表达截短ALV-Bgp85的293F细胞系表达产生，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。 9.编码权利要求8所述的截短表达的ALV-A gp85蛋白的核苷酸序列，其中，优选的，所述的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；以及编码权利要求8所述的截短表达的ALV-B gp85蛋白的核苷酸序列，其中，优选的，所述的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。 10.权利要求8所述的截短表达的ALV-A gp85蛋白以及截短表达的ALV-B gp85蛋白在制备检测A、B亚群禽白血病病毒抗体试剂中的用途。
所属类别：	发明专利