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原文传递一种检测J亚群禽白血病病毒抗体的ELISA试剂盒及其应用

专利名称：	一种检测J亚群禽白血病病毒抗体的ELISA试剂盒及其应用
摘要：	本发明公开了一种检测J亚群禽白血病病毒抗体的ELISA试剂盒及其应用。包括包被截短表达的ALV‑J gp85蛋白的酶标板，其中，所述的截短表达的ALV‑J gp85蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明利用截短表达的J亚群禽白血病病毒(ALV‑J)gp85蛋白建立了ALV‑J抗体间接ELISA检测方法，试验表明，该方法特异性好，与AB亚群ALV抗体无交叉，且其敏感性和特异性优于同类进口试剂盒，本发明的提出为ALV‑J的检测和流行病学调查以及ALV‑J的早期诊断提供了有效技术手段。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	黑龙江;23
申请人：	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)
发明人：	高玉龙;李凯;高立;高宏雷;王笑梅;潘青;祁小乐;王永强;刘长军;王牟平;崔红玉;张艳萍
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-05T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-17T00:00:00+0800
申请号：	CN201910367890.2
公开号：	CN110244039A
代理机构：	北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司
代理人：	孙皓晨;马鑫
分类号：	G01N33/535(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	150000 黑龙江省哈尔滨市南岗区马端街427号
主权项：	1.一种检测J亚群禽白血病病毒抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，包括包被截短表达的ALV-J gp85蛋白的酶标板，其中，所述的截短表达的ALV-J gp85蛋白的氨基酸序列如SEQID NO.2所示。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括HRP标记的兔抗鸡IgG、阳性对照、阴性对照、包被液、稀释液、显色液、洗涤液和终止液,优选的，所述阳性对照为J亚群禽白血病病毒阳性动物血清；所述阴性对照为健康动物血清；所述包被液为50g/L脱脂奶粉；所述稀释液为含有1％w/v牛血清白蛋白的PBST缓冲液；所述显色液为显色液TMB；所述洗涤液为PBST缓冲液；所述终止液为2M H2SO4。 3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒用于检测J亚群禽白血病病毒抗体时，具体的包括以下步骤： (1)包被截短表达的ALV-J gp85的酶标板4℃过夜后用洗涤液洗涤，37℃下用封闭液封闭1h，洗板； (2)加入对照和待测血清样品，37℃孵育，洗板； (3)加入HRP标记的兔抗鸡IgG，37℃孵育，洗板； (4)加入TMB显色液，37℃显色，最后加终止液终止反应，测定OD405 nm值，当OD450nm值≥0.20时，判定为阳性。 4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，截短表达的ALV-J gp85的包被量为2μg/ml，血清样品的稀释倍数为1:500，HRP标记的兔抗鸡IgG的稀释度为1:3000，血清样品、HRP标记的兔抗鸡IgG及TMB的作用时间分别为30min、30min和15min，封闭液为50g/L脱脂奶粉。 5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的截短表达的ALV-J gp85蛋白经由保藏编号为CGMCC NO.17418的稳定表达截短ALV-J gp85的293F细胞系表达、纯化后获得。 6.权利要求1-5任一项所述的试剂盒在制备检测J亚群禽白血病病毒抗体试剂中的应用。 7.稳定表达截短ALV-J gp85的293F细胞系，其特征在于，命名为293F-JTgp85，该细胞系保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为CGMCCNO.17418。 8.一种截短表达的ALV-J gp85蛋白，其特征在于由权利要求7所述的稳定表达截短ALV-J gp85的293F细胞系表达产生，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。 9.编码权利要求8所述的截短表达的ALV-J gp85蛋白的核苷酸序列，其中，优选的，所述的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。 10.权利要求8所述的截短表达的ALV-J gp85蛋白在制备检测J亚群禽白血病病毒抗体试剂中的用途。
所属类别：	发明专利