详情

原文传递 B型诺维氏梭菌的间接ELISA检测试剂盒

专利名称：	B型诺维氏梭菌的间接ELISA检测试剂盒
摘要：	本发明公开了一种B型诺维氏梭菌的间接ELISA检测试剂盒，所述间接ELISA检测试剂盒以B型诺维氏梭菌菌悬液为包被抗原；所述B型诺维氏梭菌菌悬液由如下方法制备而成：将B型诺维氏梭菌接种于培养基中进行増菌培养；将培养得到的B型诺维氏梭菌培养物离心，收集菌体，洗涤，用碳酸盐缓冲液重悬菌体，制成B型诺维氏梭菌菌悬液。本发明的试剂盒以完整诺维氏梭菌菌体作为包被抗原，能够高敏感及高特异性的检测羊血清中是否含有诺维氏梭菌的抗体，并依此判断羊是否感染羊黑疫。本发明的检测结果特异性强，且重复性好，能够实现在羊发病后快速做出诊断并采取紧急治疗措施。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东农业大学
发明人：	柴同杰;孟德志;韦良孟
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-24T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-17T00:00:00+0800
申请号：	CN201910670248.1
公开号：	CN110244043A
代理机构：	济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业)
代理人：	薛鹏喜
分类号：	G01N33/535(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	271018 山东省泰安市岱宗大街61号
主权项：	1.一种B型诺维氏梭菌的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述间接ELISA检测试剂盒以B型诺维氏梭菌菌悬液为包被抗原。 2.根据权利要求1所述的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述B型诺维氏梭菌菌悬液由如下方法制备而成：将B型诺维氏梭菌接种于増菌培养基中进行培养；将培养得到的B型诺维氏梭菌培养物离心，收集菌体，洗涤，用碳酸盐缓冲液重悬菌体，制成B型诺维氏梭菌菌悬液。 3.根据权利要求2所述的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述増菌培养基由如下方法制备而成：将胰蛋白胨10g、酵母浸粉10g、磷酸钾5g、葡萄糖10g、牛肉粒12g溶解于1000mL蒸馏水中，120℃高温灭菌15min，配制成基础培养基；将1g维生素K1溶于99ml无水乙醇中，过滤除菌，制备得到维生素K1溶液；将0.5g血红素溶于1mol/L的氢氧化钠1mL中，加蒸馏水至100mL，121℃高压灭菌，制备得到血红素溶液，4℃保存备用；向冷却至室温的基础培养基中无菌加入维生素K1溶液5mL、血红素溶液10mL，调节pH至7.8-8.4，即制备得到増菌培养基。 4.根据权利要求2所述的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述培养条件为：在37℃厌氧环境下培养3d；所述厌氧环境的气体组成为：80％氮气、10％氢气、10％二氧化碳。 5.根据权利要求1所述的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述间接ELISA检测试剂盒还包括：酶标板、封闭液、B型诺维氏梭菌阳性血清、B型诺维氏梭菌阴性血清、酶标二抗、底物显色液和终止液。 6.根据权利要求5所述的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述封闭液为5％脱脂奶粉。 7.根据权利要求5所述的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述酶标二抗为HRP标记的羊抗兔抗体和HRP标记的兔抗羊抗体。 8.利用权利要求1-7任一项所述的间接ELISA检测试剂盒检测腐败梭菌抗体的方法，所述方法不以疾病的诊断和治疗为目的，其特征在于，包括以下步骤： (1)用抗原包被液将B型诺维氏梭菌菌悬液稀释40倍，包被酶标板，4℃包被过夜； (2)取出酶标板，用PBST溶液洗涤，加入封闭液，37℃封闭2h； (3)分别加入稀释后的B型诺维氏梭菌阳性血清、B型诺维氏梭菌阴性血清和待检血清；37℃孵育1h； (4)加入按1:10000稀释的酶标二抗，37℃孵育1h； (5)加入底物显色液，37℃避光反应15min； (6)加入终止液终止反应，在450nm处读取吸光值，对检测结果进行判定。 9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，B型诺维氏梭菌阳性血清、B型诺维氏梭菌阴性血清和待检血清均按1:100进行稀释。 10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤(6)中，检测结果的判定标准为：若待测样品的OD值大于0.531，则判定为阳性；若待测样品的OD值小于0.531，则判定为阴性。
所属类别：	发明专利