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原文传递羊腐败梭菌的间接ELISA检测试剂盒

专利名称：	羊腐败梭菌的间接ELISA检测试剂盒
摘要：	本发明公开了一种羊腐败梭菌的间接ELISA检测试剂盒，所述间接ELISA检测试剂盒以腐败梭菌菌悬液为包被抗原。所述腐败梭菌菌悬液由如下方法制备而成：将腐败梭菌菌落接种于培养基中，在37℃厌氧环境中静置培养12‑24h；将培养得到的腐败梭菌培养物离心，收集菌体，洗涤，用碳酸盐缓冲液重悬菌体，制成腐败梭菌菌悬液。本发明的试剂盒能够高敏感及高特异性的检测羊血清中是否含有腐败梭菌的抗体，并依此判断羊是否感染腐败梭菌，能够实现在羊发病后快速做出诊断并采取紧急治疗措施。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东农业大学
发明人：	柴同杰;林静;韦良孟
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-24T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-17T00:00:00+0800
申请号：	CN201910670069.8
公开号：	CN110244042A
代理机构：	济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业)
代理人：	薛鹏喜
分类号：	G01N33/535(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	271018 山东省泰安市岱宗大街61号
主权项：	1.一种羊腐败梭菌的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述间接ELISA检测试剂盒以腐败梭菌菌悬液为包被抗原。 2.根据权利要求1所述的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述腐败梭菌菌悬液由如下方法制备而成：将腐败梭菌菌落接种于培养基中，在37℃厌氧环境中静置培养12-24h；将培养得到的腐败梭菌培养物离心，收集菌体，洗涤，用碳酸盐缓冲液重悬菌体，制成腐败梭菌菌悬液。 3.根据权利要求2所述的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述培养基由以下重量份的原料制成：厌气肉干汤35-36份、葡萄糖2-4份、L-半胱氨酸盐酸盐0.2-0.4份、胰蛋白胨6-8份、水1000份。 4.根据权利要求1所述的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述间接ELISA检测试剂盒还包括：酶标板、封闭液、腐败梭菌阳性血清、腐败梭菌阴性血清、酶标二抗、底物显色液和终止液。 5.根据权利要求4所述的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述封闭液为5％脱脂奶粉。 6.根据权利要求4所述的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述酶标二抗为HRP标记的兔抗绵羊IgG酶标二抗。 7.利用权利要求1-6任一项所述的间接ELISA检测试剂盒检测腐败梭菌抗体的方法，所述方法不以疾病的诊断和治疗为目的，其特征在于，包括以下步骤： (1)用抗原包被液将腐败梭菌稀释至OD600nm为0.06，包被酶标板，4℃包被过夜； (2)取出酶标板，用PBST溶液洗涤，加入封闭液，37℃封闭2h； (3)分别加入稀释后的腐败梭菌阳性血清、腐败梭菌阴性血清和待检血清；37℃孵育1h； (4)加入按1:8000稀释的酶标二抗，37℃孵育1h； (5)加入底物显色液，37℃避光反应15min； (6)加入终止液终止反应，在450nm处读取吸光值，对检测结果进行判定。 8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，腐败梭菌阳性血清、腐败梭菌阴性血清和待检血清均按1:1000进行稀释。 9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(6)中，检测结果的判定标准为：计算阴性样品平均值与标准差(SD)，求得为阳性临界值，为阴性临界值；若待测血清的则结果判定为阳性；若待测血清的则结果判定为阴性；若待测血清的OD450nm值介于和之间，则判定为可疑样品。
所属类别：	发明专利