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原文传递微量元素添加剂的质量控制方法

专利名称：	微量元素添加剂的质量控制方法
摘要：	本发明涉及一种微量元素添加剂的质量控制方法，包括以下步骤：S1、将小肠上皮细胞接种至细胞培养小室的上室，将DMEM完全培养液加入至下室，然后培养至小肠上皮细胞的跨膜电阻值为300Ω·cm2～600Ω·cm2时，将DMEM完全培养液更换成HBSS缓冲液，继续培养12～24小时，得到小肠单层上皮细胞模型；S2、移除细胞模型中的HBSS缓冲液，在上室加入供试溶液，在下室加入HBSS缓冲液，培养20～26小时；其中，所述供试溶液主要由HBSS缓冲液和微量元素添加剂配制而成；S3、分别收取上室和下室中的溶液并进行消解，得到上室消解液和下室消解液；采用ICP技术对上室消解液和下室消解液进行测定，得到上室消解液和下室消解液中微量元素的浓度；根据微量元素的浓度得到微量元素添加剂的转运率。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖南;43
申请人：	广州天科生物科技有限公司
发明人：	万丹;印遇龙;舒绪刚;曹孝荣;吴彤彪
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201910565279.0
公开号：	CN110261371A
代理机构：	广州华进联合专利商标代理有限公司
代理人：	侯武娇
分类号：	G01N21/73(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	410011 湖南省长沙市芙蓉区远大二路644号
主权项：	1.一种微量元素添加剂的质量控制方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、将小肠上皮细胞接种至细胞培养小室的上室，将DMEM完全培养液加入至所述细胞培养小室的下室，然后培养至所述小肠上皮细胞的跨膜电阻值为300Ω·cm2～600Ω·cm2时，将所述完全DMEM培养液更换成HBSS缓冲液，继续培养12～24小时，得到小肠上皮细胞的单层上皮细胞模型； S2、移除所述单层上皮细胞模型中的HBSS缓冲液，在所述上室加入供试溶液，在所述下室加入HBSS缓冲液，于37℃±0.2℃、CO2的体积浓度为5％±0.1％的条件下培养20～26小时；其中，所述供试溶液主要由HBSS缓冲液和微量元素添加剂配制而成； S3、分别收取所述上室和所述下室中的溶液，并进行消解，得到上室消解液和下室消解液；采用ICP分析技术分别对所述上室消解液和所述下室消解液进行测定，得到所述上室消解液和所述下室消解液中微量元素的浓度；根据所述上室消解液和所述下室消解液中微量元素的浓度，得到所述微量元素添加剂的微量元素转运率。 2.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述小肠上皮细胞选自IPEC-J2猪空肠上皮细胞系和DMT-1稳定干扰的IPEC-J2猪空肠上皮细胞系中的一种。 3.根据权利要求2所述的质量控制方法，其特征在于，所述小肠上皮细胞为复苏后5～15代的IPEC-J2猪空肠上皮细胞或复苏后5～15代的DMT-1稳定干扰的IPEC-J2猪空肠上皮细胞。 4.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，在所述步骤S1中，所述小肠上皮细胞的接种密度为1×105/mL～5×105/mL，所述培养的条件为：温度为37℃±0.2℃、CO2的体积浓度为5％±0.1％，时间为7～8天；在所述培养过程中，每1～2天更换一次DMEM完全培养液。 5.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，培养至所述小肠上皮细胞的跨膜电阻值为500Ω·cm2～600Ω·cm2时，将所述DMEM完全培养液更换成HBSS缓冲液。 6.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述DMEM完全培养液包括DMEM基础培养液、FBS和青链霉素，在所述DMEM完全培养液中，所述FBS的体积浓度为10％，所述青链霉素的体积浓度为1％。 7.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述供试溶液中微量元素的浓度为10mg/L～100mg/mL。 8.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述细胞培养小室为Transwell六孔板。 9.根据权利要求1～8任一项所述的质量控制方法，其特征在于，在所述步骤S2中，所述供试溶液的加入量为V1，所述HBSS缓冲液的加入量为V2；所述转运率的计算公式如下所示：转运率＝V2×B/(V1×A+V2×B)，其中，A为所述上室消解液中微量元素的浓度，B为所述下室消解液中微量元素的浓度。 10.根据权利要求9所述的质量控制方法，其特征在于，所述微量元素添加剂中的微量元素为螯合态的微量元素，所述质量控制方法还包括测定所述微量元素添加剂的纯度的步骤：分别构建DMT-1稳定干扰的IPEC-J2猪空肠上皮细胞的单层上皮细胞模型和IPEC-J2猪空肠上皮细胞的单层上皮细胞模型；利用所述DMT-1稳定干扰的IPEC-J2猪空肠上皮细胞单层的上皮细胞模型测定离子态微量元素添加剂的转运率，记为M；利用所述DMT-1稳定干扰的IPEC-J2猪空肠上皮细胞的单层上皮细胞模型测定所述微量元素添加剂的转运率，记为N；利用所述IPEC-J2猪空肠上皮细胞模型测定所述微量元素添加剂的转运率，记为L；采用下式得出所述微量元素添加剂的纯度：纯度＝(N-M)/L。
所属类别：	发明专利