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原文传递一种低电位抗体定向捕获型免疫传感器的制备方法及应用

专利名称：	一种低电位抗体定向捕获型免疫传感器的制备方法及应用
摘要：	本发明涉及一种低电位抗体定向捕获型免疫传感器的制备方法及应用，该发明属于纳米材料与免疫分析技术领域；本发明以牛血清蛋白BSA还原的金纳米簇Au25作为基底材料和电致发光体，以C‑反应蛋白CRP作为目标分析物，通过共价交联结合抗体定向捕获剂HWRGWVC，提出了一种抗体定向固定传感策略。以BSA‑Au25/HWRGWVC作为传感平台构建的无标记型ECL免疫传感器，抗体捕获率以及活性较传统模式有明显的提升，同时该传感器有着超高的灵敏度以及极低的检测限，在免疫分析领域有着广阔的应用前景。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	济南大学
发明人：	魏琴;贾越;杨磊;冯瑞卿
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-18T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-13T00:00:00+0800
申请号：	CN201910524505.0
公开号：	CN110231381A
代理机构：	济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业)
代理人：	李茜
分类号：	G01N27/30(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	250022 山东省济南市市中区南辛庄西路336号
主权项：	1.一种低电位抗体定向捕获型免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 将玻碳电极分别在乙醇和去离子水中超声清洗30 s，依次用1.0 μm, 0.3 μm和0.05 μm的Al2O3抛光粉对其抛光使之类似镜面般光滑，用氮气吹干； (2) 将6 μL分散均匀、浓度为1 ~ 3 mg/mL的BSA-Au25溶液滴涂至玻碳电极表面，室温下自然晾干； (3) 将上述晾干的玻碳电极插入5 ~ 10 μg/mL的HWRGWVC溶液中，于4 oC下孵化30min，超纯水洗净，室温下自然晾干； (4) 滴加6 μL 质量分数为0.1%的牛血清蛋白溶液，使之封闭非特异性活性位点，用pH7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，室温下自然晾干； (5) 滴加6 μL浓度为1 ~ 2 μg/mL的anti-CRP标准溶液，于4 oC下孵化1 h，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，4 oC晾干； (6) 滴加6 μL未知浓度的CRP溶液，于4 oC下孵化1 h，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，4 oC晾干，传感器构建完毕。 2.如权利要求1所述的一种低电位抗体定向捕获型免疫传感器的制备方法，所述基底材料BSA-Au25溶液，按以下步骤制备：室温下，将5 mL、浓度为5 ~ 10 mmol/L 的氯金酸溶液与5 mL、浓度为50 ~ 100 mg/mL的牛血清蛋白溶液充分混合，剧烈搅拌2 ~ 5 min后，加入0.5 ~ 1 mL、浓度为1 ~ 2 mol/L的氢氧化钠溶液，然后将该混合液置于37 oC 水浴中12 h，直至溶液颜色由淡黄色变为棕黄色，此时，氯金酸根离子已被BSA成功还原，得到BSA包覆的由25个金原子构成的金纳米簇BSA-Au25。 3.如权利要求1所述的一种低电位抗体定向捕获型免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述CRP为人体急性细菌感染以及动脉粥样硬化的标志物。 4.如权利要求1所述的一种低电位抗体定向捕获型免疫传感器的制备方法制备的免疫传感器用于检测CRP的浓度。 5.如权利要求4所述的检测CRP的浓度，其特征在于，检测步骤如下： (1) 使用电化学工作站的三电极体系作为激发源，Ag/AgCl电极作为参比电极，铂电极作为对电极，所制备的电致发光传感器作为工作电极，将电化学工作站和超微弱光检测仪联用，光电倍增管高压设置为600 V，循环伏安扫描电位为0 ~ 1.2 V，扫速为150 mV/s； (2) 在10 mL、pH 7.8的含浓度为50 ~ 80 mmol/L三乙胺磷酸缓冲液中，通过电致发光系统，检测在一系列不同浓度的待测物抗原修饰状态下传感器的电致发光信号强度，绘制工作曲线； (3) 将实际血清样品代替待测抗原进行检测。
所属类别：	发明专利