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原文传递一种定向偶联抗体Fc端的高分子微球及其制备方法及其应用

专利名称：	一种定向偶联抗体Fc端的高分子微球及其制备方法及其应用
摘要：	本发明提供了一种定向偶联抗体Fc端的高分子微球及其制备方法和应用，属于免疫检测技术领域，所述定向偶联抗体Fc端的高分子微球包括氨基微球和Cys‑结合亚基；所述氨基微球和Cys‑结合亚基通过双功能偶联剂的马来酰亚胺基团连接；所述Cys‑结合亚基为N端连接一个半胱氨酸的蛋白质亚基。所述定向偶联抗体Fc端的高分子微球能够特异性地结合抗体的Fc端，与抗体结合时的空间位阻小，最大程度地提高抗体Fab端的利用率。有利于放大生产，批间差小。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖南;43
申请人：	湖南博奥瑞康生物科技有限公司
发明人：	严竹林;方宇诚
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-21T00:00:00+0800
申请号：	CN201910147969.4
公开号：	CN109781978A
代理机构：	北京高沃律师事务所
代理人：	代芳
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	410000 湖南省长沙市高新开发区麓谷基地麓天路8号二期厂房7栋5楼508-A单元
主权项：	1.一种定向偶联抗体Fc端的高分子微球，其特征在于，包括氨基微球和Cys-结合亚基；所述氨基微球和Cys-结合亚基通过双功能偶联剂的马来酰亚胺基团连接；所述Cys-结合亚基为N端连接一个半胱氨酸的蛋白质亚基。 2.根据权利要求1所述的定向偶联抗体Fc端的高分子微球，其特征在于，所述氨基微球为具有氨基功能团的聚苯乙烯微球。 3.根据权利要求1所述的定向偶联抗体Fc端的高分子微球，其特征在于，所述双功能偶联剂包括N-琥珀酰亚胺基4-(马来酰亚胺基甲基)环己烷羧酸酯SMCC、或4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐Sulfo-SMCC、琥珀酰亚胺基-4-[N-马来酰亚胺甲基]-环己烷-1-羧基-[6-氨基己酸盐]LC-SMCC、[ε-马来酰亚胺]己酰氧琥珀酰亚胺酯EMCS、N-[γ-马来酰亚胺丁酰氧]琥珀酰亚胺酯GMBS和m-马来酰亚胺苯甲酰基-N-N-羟基琥珀酰亚胺酯MBS中的一种。 4.根据权利要求1所述的定向偶联抗体Fc端的高分子微球，其特征在于，所述蛋白质亚基中无游离巯基。 5.权利要求1～4任意一项所述的定向偶联抗体Fc端的高分子微球的制备方法，包括以下步骤： 1)将氨基微球与双功能偶联剂混合，进行氨基微球表面的活化，获得表面连接有马来酰亚胺基团的微球； 2)将三(2-羧乙基)膦溶液与Cys-结合亚基的PBS溶液混合，对Cys-结合亚基进行还原，获得有一个游离巯基的Cys-结合亚基； 3)将步骤1)中的表面连接有马来酰亚胺基团的微球与步骤2)中的有一个游离巯基的Cys-结合亚基混合，23～28℃偶联25～35min；获得偶联微球；所述步骤1)和2)之间无时间顺序限定。 6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述氨基微球与双功能偶联剂的比例以氨基微球上氨基的数量和双功能偶联剂上马来酰亚胺基团的数量比例计，为1：(3～8)。 7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述氨基微球表面的活化的温度为23～28℃；所述氨基微球表面的活化的时间为25～35min。 8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述三(2-羧乙基)膦溶液的浓度为0.8～1.2mmol/L，所述Cys-结合亚基的PBS溶液中Cys-结合亚基的浓度为8～12mg/mL。 9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤3)所述偶联后还包括用半胱氨酸对所述偶联微球进行封闭。 10.权利要求1～4任意一项所述的定向偶联抗体Fc端的高分子微球或权利要求5～9任意一项所述的制备方法制备获得的定向偶联抗体Fc端的高分子微球在免疫检测中的应用。
所属类别：	发明专利