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原文传递一种荧光微球与抗体的偶联方法

专利名称：	一种荧光微球与抗体的偶联方法
摘要：	本发明实施例公开了一种荧光微球与抗体的偶联方法，包括：将荧光微球进行活化处理，得到活化荧光微球；向活化荧光微球中添加含有甘油的MES缓冲液、超声混匀，再添加抗体溶液、超声反应、避光旋转混匀；待反应结束后，向沉淀物中添加封闭液、超声混匀、避光旋转混匀、离心并弃去上清液，继续添加封闭液、超声混匀、离心；收集沉淀物，并置于甘氨酸溶液中、超声分散，即得荧光微球与抗体的复合物；本发明上述偶联方法，能够保障各反应物的充分接触，能够显著提高荧光微球与抗体的偶联效率以及偶联强度，使得微球表面与抗体蛋白的结合位点充分结合，能够有效提高制备复合物的稳定性，并避免凝集现象的发生；此外，还能够提高荧光检测的灵敏度。
专利类型：	发明专利
申请人：	北京博肽未名生物技术有限公司
发明人：	管静波;赵树民;孙如;石松传;郭波
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN201911350918.8
公开号：	CN111077315A
代理机构：	北京知呱呱知识产权代理有限公司
代理人：	盛明星
分类号：	G01N33/577;G01N33/533;G01N21/64;G;G01;G01N;G01N33;G01N21;G01N33/577;G01N33/533;G01N21/64
申请人地址：	102200 北京市昌平区生命园路4号院4号楼4层402
主权项：	1.一种荧光微球与抗体的偶联方法，其特征在于，包括如下步骤： (a)将荧光微球进行活化处理，得到活化荧光微球； (b)向活化荧光微球中添加含有甘油的MES缓冲液、超声混匀，随后再添加抗体溶液、超声反应、避光旋转混匀； (c)待反应结束后，向沉淀物中添加封闭液、超声混匀、避光旋转混匀、离心并弃去上清液，随后继续添加封闭液、超声混匀、离心； (d)收集离心后的沉淀物，并置于甘氨酸溶液中、超声分散，即得荧光微球与抗体的复合物。 2.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述活化处理包括如下步骤： (1)向荧光微球中添加MES缓冲液、超声混匀、离心并弃去上清液，继续添加MES缓冲液、超声混匀、离心，收集沉淀物； (2)向沉淀物中添加MES缓冲液、超声混匀，再向混匀后的混合物中添加含有NHS的乙醇溶液和含有EDC的乙醇溶液、超声反应5min、避光旋转混匀、离心弃去上清液，随后添加柠檬酸缓冲液、超声混匀、离心，即得活化荧光微球。 3.根据权利要求2所述的偶联方法，其特征在于，所述MES缓冲液的添加量与荧光微球的体积比为(8-10)∶1；所述MES缓冲液浓度为48-52mM。 4.根据权利要求2所述的偶联方法，其特征在于，所述含有NHS的乙醇溶液中NHS的浓度为8-12mg/ml；所述含有EDC的乙醇溶液中EDC的浓度为8-12mg/ml。 5.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述荧光微球表面含有羧基，所述荧光微球选自红色荧光微球、绿色荧光微球、量子点荧光微球和时间分辨荧光微球中的任意一种。 6.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述荧光微球粒径80-500nm。 7.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述抗体为肌红蛋白单克隆抗体。 8.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述含有甘油的MES缓冲液的添加量与荧光微球的体积比为(9-11)∶1；所述抗体溶液的添加量与荧光微球的体积比为1∶(4-6)，所述抗体溶液中抗体浓度为0.8-3mg/ml。 9.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述步骤(c)中，封闭液为20％的BSA，且添加后的反应液中BSA浓度为0.4-0.6％；封闭时间为55-65min。 10.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述步骤(d)中，甘氨酸溶液中甘氨酸浓度为4.5-5.5％。
所属类别：	发明专利