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原文传递一种羧基乳胶微球与抗体的偶联方法

专利名称：	一种羧基乳胶微球与抗体的偶联方法
摘要：	本发明公开了一种羧基乳胶微球与抗体的偶联方法，涉及医学检测技术领域。该方法通过对羧基化乳胶微球进行预处理、对羧基化乳胶微球进行活化形成活化中间体，最后再与抗体偶联的过程，有效地提高羧基乳胶微球单分散性、乳胶微球活化中间体的浓度以及羧基乳胶微球与抗体的偶联效率，避免乳胶微球发生自凝，维持乳胶微球的活化状态从而提高微球与抗体的有效结合率。
专利类型：	发明专利
申请人：	深圳市瀚德标检生物工程有限公司
发明人：	郑招荣;柳秋月;梁灿丽;蔡佳龙;刘金超
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN201911407689.9
公开号：	CN111077304A
代理机构：	深圳市精英专利事务所
代理人：	于建
分类号：	G01N33/543;G01N33/531;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/543;G01N33/531
申请人地址：	518000 广东省深圳市坪山区坪山街道办事处六联社区浪尾村宝山路16号A栋02区4楼
主权项：	1.一种羧基乳胶微球与抗体的偶联方法，其特征在于，包括以下步骤： S1，将质量分数为4％羧基乳胶微球原液与活化缓冲液按体积比1:15-25充分混合，离心，弃上清，向沉淀中加入4倍所述羧基乳胶微球原液体积的活化缓冲液，再次混合，超声，至溶液中的羧基乳胶微球处于单分散状态，得到微球悬液，将微球悬液于4℃保存备用； S2，将100g/L的EDC水溶液、100g/L的Sulfo-NHS水溶液以及所述微球悬液按体积比0.8-1.2:5.5-6.5:65-75快速充分混合，反应30min，得到第一混合液； S3，对所述第一混合液进行超声，至所述第一混合液中的羧基乳胶微球处于单分散状态后，离心洗涤，得到沉淀液，向沉淀液中加入质量分数为10％的Tween-20混匀，得到活化微球液，将活化微球液于4℃保存备用，所述活化微球液中的Tween-20的质量分数为0.1-0.2％； S4，将0.1～1ug/μL的抗体溶液与所述活化微球液按体积比为3-4:1进行混合，偶联反应2h以上，得到微球-抗体标记物溶液； S5，向所述微球-抗体标记物溶液中加入1mol/L乙醇胺溶液，旋转混合均匀，得到第三混合液，所述第三混合液中乙醇胺的浓度为5～20mmol/L； S6，对所述第三混合液进行超声、离心洗涤，得到微球-抗体标记物沉淀，向所述微球-抗体标记物沉淀中加入保存液重悬，即得到含有质量分数0.5％的羧基乳胶微球-抗体标记物重悬液。 2.如权利要求1所述的羧基乳胶微球与抗体的偶联方法，其特征在于，所述步骤S1之前还包括：将所述羧基乳胶微球液超声3-10min。 3.如权利要求1所述的羧基乳胶微球与抗体的偶联方法，其特征在于，所述步骤S3中离心洗涤，得到沉淀液的具体操作包括步骤S301-302： S301，将超声后的第二混合液进行第一次离心，8000-12000rpm，10-20min，弃上清，将沉淀用1mL的SDS溶液重悬，得到第一重悬液，所述SDS溶液的质量分数为0.005％； S302，将所述第一重悬液进行第二次离心，8000-12000rpm，10-20min，弃上清，加入与所述羧基乳胶微球原液体积一致的纯化水重悬沉淀，得到第二重悬液，超声所述第二重悬液至所述第二重悬液中的羧基乳胶微球处于单分散状态，即得到所述沉淀液。 4.如权利要求1所述的羧基乳胶微球与抗体的偶联方法，其特征在于，所述步骤S6离心洗涤，得到微球-抗体标记物沉淀的具体操作包括步骤S601-602： S601，将超声后的第三混合液进行第一次离心，8000-12000rpm，10-20min，弃上清，将沉淀用1mL的保存液重悬，得到第三重悬液； S602，将所述第三重悬液进行第二次离心，8000-12000rpm，10-20min，弃上清，即得到微球-抗体标记物沉淀。 5.如权利要求4所述的羧基乳胶微球与抗体的偶联方法，其特征在于，所述步骤S6之后，还包括将所述羧基乳胶微球-抗体标记物重悬液于4℃冷藏保存的步骤。 6.如权利要求1所述的羧基乳胶微球与抗体的偶联方法，其特征在于，所述抗体溶液具体为抗体原液与抗体缓冲液配制而得，所述抗体缓冲液为100mmol/L的HEPES缓冲液或100mmol/L的PB缓冲液。 7.如权利要求1所述的羧基乳胶微球与抗体的偶联方法，其特征在于，所述活化缓冲液的pH＝6，每1L的活化缓冲液中包括19-20g MES，0.001-1g SDS。 8.如权利要求1所述的羧基乳胶微球与抗体的偶联方法，其特征在于，所述保存液pH＝8.5，所述保存液由0.5g BSA，0.5g Tween-20和0.05g ProClin300加入100mL 10mmol/L的Tris-HCl缓冲液中配制而得。
所属类别：	发明专利