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原文传递一种荧光乳胶微球与蛋白的偶联方法

专利名称：	一种荧光乳胶微球与蛋白的偶联方法
摘要：	本发明实施例公开了一种荧光乳胶微球与蛋白的偶联方法，包括如下步骤：将荧光乳胶微球进行活化处理、重悬，得到荧光乳胶微球溶液；采用甘氨酸溶液稀释蛋白，然后加入到荧光乳胶微球溶液中，超声反应，之后旋转混匀反应，甘氨酸和蛋白进行共标记；待反应结束后，向反应液中添加封闭液进行封闭、离心，收集沉淀物；将沉淀物置于甘氨酸溶液中、超声分散，即得荧光乳胶微球与蛋白偶联的复合物；该偶联方法能够提高荧光乳胶微球与蛋白的偶联效率以及偶联强度，使得微球表面与蛋白的结合位点充分结合，能够有效提高制备复合物的稳定性，并避免凝集现象的发生；此外，还能够提高荧光检测的灵敏度。
专利类型：	发明专利
申请人：	北京博肽未名生物技术有限公司
发明人：	管静波;赵树民;孙如;石松传;郭波
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN201911349156.X
公开号：	CN111077314A
代理机构：	北京知呱呱知识产权代理有限公司
代理人：	盛明星
分类号：	G01N33/577;G01N33/533;G01N21/64;G;G01;G01N;G01N33;G01N21;G01N33/577;G01N33/533;G01N21/64
申请人地址：	102200 北京市昌平区生命园路4号院4号楼4层402
主权项：	1.一种荧光乳胶微球与蛋白的偶联方法，其特征在于，包括如下步骤： (a)将荧光乳胶微球进行活化处理、重悬，得到荧光乳胶微球溶液； (b)采用甘氨酸溶液稀释蛋白，然后加入到荧光乳胶微球溶液中，超声反应，之后旋转混匀反应，甘氨酸和蛋白进行共标记； (c)待反应结束后，向反应液中添加封闭液进行封闭、离心，收集沉淀物； (d)将沉淀物置于甘氨酸溶液中、超声分散，即得荧光乳胶微球与蛋白偶联的复合物。 2.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述蛋白为心肌肌钙蛋白I单克隆抗体。 3.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述甘氨酸溶液浓度为0.01-0.2mM。 4.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述活化处理为：将荧光乳胶微球进行稀释，随后依次向稀释后的荧光乳胶微球溶液中添加含有NHS的乙醇溶液和含有EDC的乙醇溶液、混匀、常温反应、超声处理、离心，收集活化后的荧光乳胶微球。 5.根据权利要求4所述的偶联方法，其特征在于，所述含有NHS的乙醇溶液和含有EDC的乙醇溶液的添加量分别与荧光乳胶微球溶液的体积比均为1∶(22-28)；所述含有NHS的乙醇溶液中NHS的浓度为8-12mg/ml；所述含有EDC的乙醇溶液中EDC的浓度为8-12mg/ml。 6.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述蛋白的添加至终浓度为20-200ug/ml。 7.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述步骤(d)中，超声分散至分散系数PDI≤0.07。 8.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述步骤(c)中，封闭液为20％的BSA，且添加后的反应液中BSA浓度为0.4-0.6％；封闭时间为55-65min。 9.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述步骤(d)中，甘氨酸溶液中甘氨酸浓度为4.5-5.5％。
所属类别：	发明专利