详情

原文传递一种荧光微球与抗体的偶联方法

专利名称：	一种荧光微球与抗体的偶联方法
摘要：	本发明实施例公开了一种荧光微球与抗体的偶联方法，包括如下步骤：(a)将荧光微球进行活化处理、重悬，得到微球悬浮液；(b)将抗体溶液添加至微球悬浮液中进行反应、超声处理、继续反应；(c)待反应结束后，向反应液中添加封闭液进行封闭、离心，收集沉淀物；(d)将沉淀物置于甘氨酸溶液中、超声分散，即得荧光微球与抗体偶联的复合物；本发明上述偶联方法，通过对荧光微球进行活化处理，以及通过超声处理保障各反应物的充分接触，能够显著提高荧光微球与抗体的偶联效率以及偶联强度，使得微球表面与抗体蛋白的结合位点充分结合，能够有效提高制备复合物的稳定性，并避免凝集现象的发生；此外，还能够提高荧光检测的灵敏度。
专利类型：	发明专利
申请人：	北京博肽未名生物技术有限公司
发明人：	管静波;赵树民;孙如;石松传;郭波
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN201911350928.1
公开号：	CN111077316A
代理机构：	北京知呱呱知识产权代理有限公司
代理人：	盛明星
分类号：	G01N33/577;G01N33/533;G01N21/64;G;G01;G01N;G01N33;G01N21;G01N33/577;G01N33/533;G01N21/64
申请人地址：	102200 北京市昌平区生命园路4号院4号楼4层402
主权项：	1.一种荧光微球与抗体的偶联方法，其特征在于，包括如下步骤： (a)将荧光微球进行活化处理、重悬，得到微球悬浮液； (b)将抗体溶液添加至微球悬浮液中进行反应、超声处理、继续反应； (c)待反应结束后，向反应液中添加封闭液进行封闭、离心，收集沉淀物； (d)将沉淀物置于甘氨酸溶液中、超声分散，即得荧光微球与抗体偶联的复合物。 2.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述步骤(a)中，活化处理具体为：将荧光微球清洗后进行超声分散、稀释，随后依次向稀释后的荧光微球溶液中添加含有NHS的乙醇溶液和含有EDC的乙醇溶液、混匀、常温反应、超声处理、离心，收集活化后的荧光微球。 3.根据权利要求2所述的偶联方法，其特征在于，所述稀释采用的稀释剂为含聚乙烯吡咯烷酮的MES缓冲液，聚乙烯吡咯烷酮浓度为0.05-2％，稀释后的荧光微球固含量为0.8-1.2‰。 4.根据权利要求2所述的偶联方法，其特征在于，所述含有NHS的乙醇溶液和含有EDC的乙醇溶液的添加量分别与荧光微球溶液的体积比均为1∶(22-28)；所述含有NHS的乙醇溶液中NHS的浓度为8-12mg/ml；所述含有EDC的乙醇溶液中EDC的浓度为8-12mg/ml。 5.根据权利要求2所述的偶联方法，其特征在于，所述常温反应时间为25-35min。 6.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述步骤(a)中，微球悬浮液中荧光微球的固含量为0.08-0.12％。 7.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述步骤(b)中，抗体溶液与微球悬浮液的体积比1∶(180-220)；抗体溶液中抗体浓度为2.8-3.0mg/ml。 8.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述步骤(b)中，反应时间为50-70min；超声处理时间为55-65s，超声波频率40KHZ；继续反应时间为55-65min。 9.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述步骤(c)中，封闭液为20％的BSA，且添加后的反应液中BSA浓度为0.4-0.6％；封闭时间为55-65min。 10.根据权利要求1所述的偶联方法，其特征在于，所述步骤(d)中，甘氨酸溶液中甘氨酸浓度为4.5-5.5％。
所属类别：	发明专利