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原文传递一种基于质谱的完整N-糖肽相对定量方法

专利名称：	一种基于质谱的完整N-糖肽相对定量方法
摘要：	本发明涉及一种基于质谱的完整N‑糖肽相对定量方法，包括以下步骤：培养正常生理体系和患病体系的细胞，提取两种细胞体系的全部蛋白质组，富集两种细胞的完整N‑糖肽，使用同位素酯化反应对完整N‑糖肽C端进行标记，使用同位素二甲基标记技术对完整N‑糖肽N端进行标记，将两种标记后的完整N‑糖肽1:1混合，使用RPLC‑MS/MS进行检测，使用GPSeeker数据库搜索软件进行数据分析。与现有技术相比，本发明能够在完整N‑糖肽水平上对正常体系和患病体系进行分析，找出潜在的生物标志物，方法简明，鉴定准确。适用于基于质谱的完整N‑糖肽的定量分析。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	同济大学
发明人：	田志新;连浩志;王悦;肖开捷
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-30T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201910460317.6
公开号：	CN110261500A
代理机构：	上海科盛知识产权代理有限公司
代理人：	褚明伟
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	200092 上海市杨浦区四平路1239号
主权项：	1.一种基于质谱的完整N-糖肽相对定量方法，其特征在于，包括以下步骤：培养正常生理体系和患病体系的细胞，提取两种细胞体系的全部蛋白质组，富集两种细胞的完整N-糖肽，使用同位素酯化反应对完整N-糖肽C端进行标记，使用同位素二甲基标记技术对完整N-糖肽N端进行标记，将两种标记后的完整N-糖肽1:1混合，使用RPLC-MS/MS进行检测，使用GPSeeker数据库搜索软件进行数据分析。 2.根据权利要求1所述的一种基于质谱的完整N-糖肽相对定量方法，其特征在于，在完整N-糖肽的C端使用酯化反应进行同位素标记时，其中，正常生理体系完整N-糖肽的C端使用CH3CH2CH2OH试剂进行标记，患病体系的C端使用(CD3)2CHOH试剂进行标记。 3.根据权利要求1所述的一种基于质谱的完整N-糖肽相对定量方法，其特征在于，在完整N-糖肽的N端通过控制反应体系的pH值实现只对N端的二甲基标记，对于正常体系完整N-糖肽使用DCDO试剂和NaBD3CN试剂进行同位素标记，对于患病体系完整N-糖肽使用HCHO和NaBH3CN进行标记。 4.根据权利要求1所述的一种基于质谱的完整N-糖肽相对定量方法，其特征在于，1:1混合指：按照正常生理体系和患病体系标记后完整N-糖肽的重量、体积或摩尔量以1:1比例进行混合。 5.根据权利要求1所述的一种基于质谱的完整N-糖肽相对定量方法，其特征在于，经过同位素酯化反应、同位素二甲基标记技术对完整N-糖肽进行标记后，两种体系的完整N-糖肽具有相同的分子量。 6.根据权利要求1所述的一种基于质谱的完整N-糖肽相对定量方法，其特征在于，使用RPLC-MS/MS进行检测时，在液相色谱中两种体系的完整N-糖肽同时洗脱，两种体系的完整N-糖肽同时进入质谱进行检测，通过二级质谱的b/y离子进行相对定量。 7.根据权利要求1所述的一种基于质谱的完整N-糖肽相对定量方法，其特征在于，使用GPSeeker数据库搜索软件进行数据分析是指：对采集到的质谱数据进行定性和定量搜索，找出患病体系相对于正常体系差异表达的完整N-糖肽，获得其结构信息。 8.根据权利要求1所述的一种基于质谱的完整N-糖肽相对定量方法，其特征在于，使用Trypsin酶切细胞的蛋白质，zic-HILIC富集细胞的完整N-糖肽。 9.根据权利要求8所述的一种基于质谱的完整N-糖肽相对定量方法，其特征在于，蛋白质提取后，还原、烷基化、天冬氨酸及谷氨酸酯化保护，再使用Trypsin酶切细胞的蛋白质，zic-HILIC富集细胞的完整N-糖肽。
所属类别：	发明专利