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一种南美白对虾性腺组织冷冻切片的制作方法
| 专利名称： | 一种南美白对虾性腺组织冷冻切片的制作方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种南美白对虾性腺组织冷冻切片的制作方法，包括如下步骤：甲醛固定后组织的脱水处理、组织包埋、冷冻切片、染色与封片。本发明提供的方法，针对经甲醛固定后的南美白对虾性腺组织的冷冻切片技术，区别于新鲜组织的冷冻切片技术。相对于传统的石蜡切片方法，具有更高的切片效率，节约了时间。相比于一般的冷冻切片方法，具有更好的切片效果，有利于染色观察。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 浙江;33 |
| 申请人： | 浙江省海洋水产养殖研究所 |
| 发明人： | 张敏;王瑶华;李方;冀德伟;胡利华;闫茂仓;柴雪良 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-06-27T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-09-24T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910568173.6 |
| 公开号： | CN110274807A |
| 代理机构： | 北京天盾知识产权代理有限公司 |
| 代理人： | 刘亚斌 |
| 分类号： | G01N1/28(2006.01);G;G01;G01N;G01N1 |
| 申请人地址： | 325000 浙江省温州市河通桥6-1号 |
| 主权项： | 1.一种南美白对虾性腺组织冷冻切片的制作方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)甲醛固定后组织的脱水处理：取南美白对虾卵巢组织，固定于10％甲醛溶液中备用，再用手术刀片切取长度为0.5-1.0cm的卵巢组织，浸泡在20％蔗糖溶液与OTC冷冻包埋剂体积为1:1的液体，浸泡时间至少16个小时； (2)组织包埋：将步骤(1)中浸泡好的卵巢组织取出，放入盛放OTC冷冻包埋剂的圆柱形软管模型中，用镊子夹取模型在液氮中速冻15-20s，然后放进冷却好的冷冻切片机中，去除模型后得到样品，将样品用OTC冷冻包埋剂固定在预冷过的样品托上，放在速冻架上等待包埋剂完全冷冻； (3)冷冻切片：调节冷冻切片机冷冻箱温度为-18℃，样品头温度为-15℃，将样品托插入样品头，调整好样品与刀片的位置，先用修块模式进行修块使包埋的卵巢组织露出，后调至切片模式，将切片厚度调为5μm，进行切片； (4)切片固定：将步骤(3)切好的薄片用镊子或样品针捻于载玻片上，用甲醇固定(将载玻片在甲醇中浸泡5-10s)，晾干后放进染色架中； (5)染色：将步骤(4)中得到的组织切片先用苏木素染液染色1.5min，然后用水冲洗5min；再在分化液分化30s；接着在水中浸泡15min或温水(50℃)浸泡5min；然后置于伊红染液1min，染色后用水冲洗；水中浸泡5min，脱水后使之透明，进行封片。 2.根据权利要求1所述的一种南美白对虾性腺组织冷冻切片的制作方法，脱水与封片的具体步骤如下：将载玻片先后分别置于95％乙醇(Ⅰ)溶液、95％乙醇(Ⅱ)溶液、100％乙醇(Ⅰ)溶液、100％乙醇(Ⅱ)溶液、二甲苯(Ⅰ)溶液、二甲苯(Ⅱ)溶液中浸泡1min；最后用中性树胶封固。 3.根据权利要求1所述的一种南美白对虾性腺组织冷冻切片的制作方法，其特征在于，所述冷冻切片机型号为Leica CM1950。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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