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原文传递一种推算金腰属植物基因组大小的方法

专利名称：	一种推算金腰属植物基因组大小的方法
摘要：	本发明公开一种推算金腰属植物基因组大小的方法。该方法包括以新鲜金腰属植物为材料、细胞核解离液配置、单细胞悬浮液制备、显微镜镜检、参照样本的选择，最终通过流式细胞仪推算出样品基因组大小的过程。本发明细胞核解离液配置简单，解离效率高，镜检效果明显，适用于金腰属各种植物的基因组大小的推算。为金腰的后续科学研究提供帮助，为金腰属植物的分类及开发应用研究奠定基础。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	中南民族大学
发明人：	覃瑞;刘虹;吴智华;廖瑞;董翔
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-21T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-24T00:00:00+0800
申请号：	CN201910542165.4
公开号：	CN110274865A
代理机构：	北京市诚辉律师事务所
代理人：	范盈
分类号：	G01N15/14(2006.01);G;G01;G01N;G01N15
申请人地址：	430074 湖北省武汉市洪山区民族大道182号
主权项：	1.一种推算金腰属植物基因组大小的方法，其特征在于，所述方法的步骤为： (1).获取叶片：选取新鲜叶片1平方厘米左右； (2).预处理：加入0.5ml左右预冷的改良Hepes解离液，游离细胞核，所述改良Hepes解离液为10mmol/L MgSO4·7H2O，50mmol/L KCl，5mmol/L Hepes(pH 8)，10mmol/L DTT，0.25％Triton X-100，0.2mmol/L Tris·HCl； (3).细胞核悬浮液制备：使用滤膜将悬浮液过滤至1.5ml的离心管中，加入1/10体积的DAPI溶液，避光染色30分钟； (4).参照样本的选择：选取大豆新鲜叶片组织，与重复步骤(1)-(3)，制备成细胞核悬浮液，备用； (5).镜检观察； (6).上机检测：先检测大豆细胞核悬浮液，再检测金腰属物种细胞核悬浮液； (7).样本基因组大小预测：通过比对参照样本与目标样本的峰值图，推算出金腰的基因组大小。 2.权利要求1所述的推算金腰属植物基因组大小的方法，其特征在于，所述金腰属植物为大叶金腰、肾萼金腰或中华金腰。 3.权利要求1所述的推算金腰属植物基因组大小的方法，其特征在于，所述滤膜为400目。 4.权利要求1所述的推算金腰属植物基因组大小的方法，其特征在于，所述DAPI溶液浓度为：10μg/ml。 5.权利要求1所述的推算金腰属植物基因组大小的方法，其特征在于，所述大豆基因组大小为：950M。 6.权利要求1所述的推算金腰属植物基因组大小的方法，其特征在于，所述方法的步骤为： (1).获取叶片：选取生长茂盛的金腰植株，取其新鲜叶片1平方厘米左右，然后用蒸馏水清洗干净叶片表面附着的泥土，后续实验操作过程需低温操作在冰上进行； (2).预处理：将洗干净的叶片放入预冷的塑料培养皿中，加入0.5ml左右预冷的Hepes解离液，用锋利的刀片一次性快速切碎，整个过程，材料须浸没在解离液里，以便更好的游离细胞核，； (3).细胞核悬浮液制备：使用滤膜将悬浮液过滤至1.5ml的离心管中，加入1/10体积的DAPI溶液，避光染色30分钟，所述滤膜为400目，所述DAPI溶液浓度为：10μg/ml； (4).参照样本的选择：选取大豆新鲜叶片组织，与金腰做相同处理，制备成细胞核悬浮液，备用； (5).镜检观察：使用OLYMPUS BX51显微镜，紫外光源，20x镜下观察，找到荧光染色的白点，既为染色后的细胞核，然后用OLYMPUS DP73摄像头拍照，保存照片； (6).上机检测：将制备的细胞核悬浮液移至上样管，上机检测，所述上机检测的顺序为：先检测大豆细胞核悬浮液，再检测金腰属物种细胞核悬浮液，所述大豆基因组大小为：950M； (7).样本基因组大小预测：通过比对参照样本与目标样本的峰值图，推算出金腰的基因组大小。 7.权利要求1-6所述推算金腰属植物基因组大小的方法在推算金腰属植物基因组大小中的用途。 8.权利要求7所述的用途，其特征在于，所述金腰属植物为大叶金腰、肾萼金腰或中华金腰。
所属类别：	发明专利