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原文传递一种EGCG的液质联用分析方法

专利名称：	一种EGCG的液质联用分析方法
摘要：	本发明属于液质联用检测技术领域，具体公开了一种EGCG的液质联用分析方法，包括以下步骤：S1、样品采集，获得血浆样品；S2、样品预处理：加入内标工作液，经乙腈沉淀蛋白，甲醇：水溶液(10:90，v:v)复溶上清液，得到待测样品；S3、液质联用测定：用于定量分析的离子反应：EGCG为m/z457.1→m/z169.0和内标为m/z269.0→m/z105.9；S4、定量分析：建立标准曲线，根据线性回归方程及待测样品检测所得的峰面积计算出血浆样品中EGCG的浓度。本发明的液质联用分析方法具有高分离度、高专属性、高灵敏度和精密度、高重现性的优势，可以实现快速、准确地对血浆样品中EGCG的定量分析，定量下限低至50ng/mL。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	武汉海谱生物医药科技有限公司
发明人：	吴琳;胡汉高;李盈
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-19T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201910656330.9
公开号：	CN110261519A
代理机构：	南京纵横知识产权代理有限公司
代理人：	徐瑛
分类号：	G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区东一产业园光谷大道金融后台服务中心基地建设项目二期B5幢16层2号02室
主权项：	1.一种EGCG的液质联用分析方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、样品采集：采集全血后离心，获得血浆样品； S2、样品预处理：步骤S1的血浆样品：内标工作液：乙腈按体积比8：5：50混匀，室温下高速离心，收集上清，加入三倍体积的甲醇：水溶液(10:90，v:v)复溶，得到待测样品； S3、液质联用测定：液相色谱测定条件为：色谱柱：Xbridge C18，进样器温度：4℃，洗针液：甲醇，流动相A：0.3％甲酸的水溶液，流动相B：0.3％甲酸的乙腈溶液，梯度洗脱，流速为1.0mL/min，进样量为7μL，分析时间3.20min；质谱条件为：电喷雾离子源(ESI)，负离子模式，扫描方式为多反应离子监测(MRM)；喷雾电压为-4500V，喷雾温度为550℃；雾化气种类GS1：50psi；辅助气种类GS2：50psi；气帘气种类CUR：30psi；碰撞气种类CAD：Medium；去簇电压(DP)：EGCG为-20.0V和内标为-37.0V；碰撞电压(CE)：EGCG为-10.0V和内标为-10.0V；入口电压(EP)：EGCG为-23.0V和内标为-43.0V；碰撞室出口电压(CXP)：EGCG为-15.0V和内标为-15.0V；用于定量分析的离子反应：EGCG为m/z457.1→m/z169.0和内标为m/z269.0→m/z105.9； S4、定量分析：建立标准曲线，根据线性回归方程及待测样品检测所得的峰面积比值计算出血浆样品中EGCG的浓度。 2.如权利要求1所述的EGCG的液质联用分析方法，其特征在于，所述步骤S3中，所述梯度洗脱的程序为： 0-0.20min：90％(vt)流动相A+10％(vt)流动相B； 0.20-1.20min：5％(vt)流动相A+95％(vt)流动相B； 1.20-1.80min：5％(vt)流动相A+95％(vt)流动相B； 1.80-1.90min：90％(vt)流动相A+10％(vt)流动相B； 1.90-2.10min：90％(vt)流动相A+10％(vt)流动相B； 2.10-3.20min：90％(vt)流动相A+10％(vt)流动相B。 3.如权利要求1所述的EGCG的液质联用分析方法，其特征在于，步骤S2中，所述内标工作液中内标物为甲苯磺丁脲，所述甲苯磺丁脲工作液浓度为500ng/mL。 4.如权利要求1所述的EGCG的液质联用分析方法，其特征在于，步骤S2中，所述高速离心条件为10000g、10min。 5.如权利要求1所述的EGCG的液质联用分析方法，其特征在于，步骤S1中，所述样品采集具体为：采集全血后离心，收集血浆，加入含稳定剂的水溶液，稳定剂终浓度为5mg/mL，混合均匀，获得血浆样品。 6.如权利要求5所述的EGCG的液质联用分析方法，其特征在于，所述稳定剂为抗坏血酸。 7.如权利要求1所述的EGCG的液质联用分析方法，其特征在于，步骤S4中，所述标准曲线的建立包括以下步骤： P1、以甲醇：水溶液(10:90，v:v)为溶剂配制浓度梯度范围为50～10000ng/mL的EGCG标准溶液； P2、加入内标工作液，混匀； P3、液质联用测定，以EGCG标准溶液的浓度为横坐标，分析物和内标峰面积比值为纵坐标，用加权最小二乘法得线性回归方程y＝0.000264x+0.00944，R2＝0.9959。
所属类别：	发明专利