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原文传递一种大叶金腰染色体核型分析的制片方法

专利名称：	一种大叶金腰染色体核型分析的制片方法
摘要：	本发明涉及一种大叶金腰染色体核型分析的制片方法,大叶金腰Chrysosplenium macrophyllum Oliv.是一种低矮的常绿草本，因含有黄酮类而具有重要药用开发价值。本发明公开一种适合大叶金腰染色体核型分析的制片方法，包括从大叶金腰新鲜植株获取根尖、预处理、固定、前低渗、酶解去壁、后低渗、涂片和染色、镜检和观察的过程。本发明提供一种简单适用的大叶金腰染色体核型分析制片方法，为大叶金腰的后续科学研究提供帮助，为金腰属植物的分类及开发应用研究奠定基础。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	中南民族大学
发明人：	刘虹;覃瑞;吴智华;吴士筠;阮易柔;黄文
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-21T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-20T00:00:00+0800
申请号：	CN201910542384.2
公开号：	CN110261206A
代理机构：	北京市诚辉律师事务所
代理人：	范盈
分类号：	G01N1/30(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	430074 湖北省武汉市洪山区民族大道182号
主权项：	1.一种金腰染色体制片方法，具体步骤为: (1)获取根尖：取生长茂盛的金腰植株的根尖； (2)预处理：将根尖置于4℃冰箱中进行预处理2-3h； (3)固定：将预处理后的根尖投入盛有固定液中进行固定保存； (4)前低渗：取出根尖，置于重蒸水中处理40min； (5)酶解去壁：加入2％混合酶0.2mL，然后放入28℃水浴锅中水浴4.5h，所述混合酶为4％纤维素酶与4％果胶酶等体积混合。 (6)后低渗：吸去酶液，用重蒸水清洗根尖，置于重蒸水中进行低渗水浴28℃，40min左右； (7)敲片和染色：取低渗后的根尖进行敲片处理，并放入有改良吉姆萨染液的染缸中染色40min，所述改良吉姆萨染液的配方为：先由吉姆萨粉末与甘油按照质量体积比2:1研磨混合制成母液，实验取用时将吉姆萨母液与磷酸盐缓冲液按体积比1：20进行； (8)镜检观察。 2.权利要求1所述的金腰染色体制片方法，其特征在于，所述金腰为大叶金腰。 3.权利要求1金腰染色体制片方法，其特征在于，所述步骤1)的步骤为晴天的上午9点左右，选取生长茂盛的大叶金腰植株，取其根尖部位3cm左右，然后用蒸馏水清洗干净根表面附着的泥土。 4.权利要求1金腰染色体制片方法，其特征在于，所述步骤3)为将预处理后的根尖吸去水分，投入盛有固定液的小瓶子中，进行固定保存，或者固定24h后转入75％乙醇溶液中长期保存，保存在4℃冰箱中。 5.权利要求1所述的金腰染色体制片方法，其特征在于，所述步骤4)为用镊子取出根尖，然后重蒸水洗净，在培养皿中切取尖端白色部分1mm左右，置于盛有低渗液(双蒸水)的EP管中浸泡处理40min，期间需更换低渗液3次。 6.权利要求1所述的金腰染色体制片方法，其特征在于，所述步骤6)为吸去酶液，用重蒸水清洗根尖2-3次，然后置于重蒸水中进行低渗，水浴28℃，40min左右。 7.权利要求1所述的金腰染色体制片方法，其特征在于，所述步骤7)为。取低渗后的根尖2-3个于滴有固定液(乙醇：冰醋酸＝3:1)的载玻片上，并用玻璃棒尽量压碎根尖，分散细胞，压碎后使破碎的组织细胞在载玻片上尽量铺散均匀，压碎根尖期间加入固定液保持水环境，根尖组织均匀分散在载玻片后用酒精灯内焰干燥。干燥后的载玻片直接放入有改良吉姆萨染液的染缸中浸染40min，染色完成后，载玻片用重蒸水冲洗干净，备用，所述改良吉姆萨染液的配方为：先由吉姆萨粉末与甘油按照质量体积比2:1研磨混合制成母液，实验取用时将吉姆萨母液与磷酸盐缓冲液按体积比1：20进行。 8.权利要求1所述的金腰染色体制片方法，其特征在于，所述方法的步骤为： (1)获取根尖：在晴天的上午9点左右，选取盆栽里的生长茂盛的大叶金腰植株，取其根尖部位3cm左右，然后用蒸馏水清洗干净根表面附着的泥土； (2)预处理：将洗干净的根尖放入盛有重蒸水的小瓶中，置于4℃冰箱中，进行预处理2.5h； (3)固定：将预处理后的根尖吸去水分，投入盛有固定液(乙醇：冰醋酸＝3:1)的小瓶子中，进行固定保存，或者固定24h后转入75％乙醇溶液中长期保存，保存在4℃冰箱中； (4)前低渗：用镊子取出根尖，然后重蒸水洗净，在培养皿中切取尖端白色部分1mm左右，置于盛有低渗液(双蒸水)的EP管中浸泡处理40min，期间可更换低渗液3次； (5)酶解去壁：低渗后，用移液器吸去低渗液，用移液器吸去低渗液，加入2％混合酶(4％的Cellulase R-10，4％的PECTOLYASE Y-23按照1:1制备成混合酶)0.2mL左右，然后放入28℃水浴锅中水浴4.5h，酶解过程中轻摇EP管3次左右，使酶液充分作用于材料。 (6)后低渗：吸去酶液，用重蒸水清洗根尖2-3次，然后置于重蒸水中进行低渗，水浴28℃，40min左右； (7)敲片和染色：取低渗后的根尖2-3个于滴有固定液(乙醇：冰醋酸＝3:1)的载玻片上，并用玻璃棒尽量压碎根尖，分散细胞，压碎后使破碎的组织细胞在载玻片上尽量铺散均匀，压碎根尖期间加入固定液保持水环境，根尖组织均匀分散在载玻片后用酒精灯内焰干燥。干燥后的载玻片直接放入有改良吉姆萨染液的染缸中浸没染色40min，染色完成后，载玻片用重蒸水冲洗干净，备用，所述改良吉姆萨染液的配方为：先由吉姆萨粉末与甘油按照质量体积比2:1研磨混合制成母液，实验取用时将吉姆萨母液与磷酸盐缓冲液按体积比1：20进行； (8)镜检观察：使用OLYMPUS BX51明视野显微镜，10倍目镜、100倍油镜观察，找到理想分散且清晰的染色体，然后用OLYMPUS DP73摄像头拍照，保存照片。 9.权利要求1-8所述金腰染色体制片方法制备的含有金腰染色体吉姆萨染色核型的载玻片产品。 10.权利要求1-8所述金腰染色体制片方法在制备金腰染色体核型中的用途。
所属类别：	发明专利