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原文传递肺炎支原体检测用试剂盒、其制备方法以及肺炎支原体的检测方法

专利名称：	肺炎支原体检测用试剂盒、其制备方法以及肺炎支原体的检测方法
摘要：	本发明提供一种肺炎支原体检测用试剂盒、其制备方法以及肺炎支原体的检测方法。该试剂盒包括校准品、样本处理液、磁微粒试剂、标记抗体试剂、清洗液和激发物。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	科尼格沃斯(无锡)医学科技有限公司
发明人：	王牧;孙旭
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-27T00:00:00+0800
申请号：	CN201910687512.2
公开号：	CN110286236A
代理机构：	北京奉思知识产权代理有限公司
代理人：	邹轶鲛;石红艳
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	214125 江苏省无锡市滨湖区绣溪路58-7号
主权项：	1.一种肺炎支原体检测用试剂盒，包括校准品、样本处理液、磁微粒试剂、标记抗体试剂、清洗液和激发物。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述校准品包括在1×103～1×105CFU/mL范围内的2个以上不同浓度的肺炎支原体抗原的校准品。 3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其中，所述标记抗体试剂为吖啶酯类化合物标记的肺炎支原体检测抗体，所述吖啶酯类化合物为选自吖啶酯、吖啶酯磺酰胺、吖啶酯甲苯磺酰胺、吖啶酯对甲基磺酰胺和吖啶酯三氟甲基磺酰胺中的任意一种，并且所述吖啶酯类化合物优选为吖啶酯。 4.根据权利要求1～3任意一项所述的试剂盒，其中，所述磁微粒试剂为磁微粒包被的抗肺炎支原体单克隆捕获抗体。 5.根据权利要求1～4任意一项所述的试剂盒，其中，所述磁微粒的粒径为1～5μm，表面电荷密度为5～50μmol/g。 6.根据权利要求1～5任意一项所述的试剂盒，其中，所述激发物包括第一激发物和第二激发物，并且所述第一激发物为硝酸过氧化氢水溶液，所述第二激发物为氢氧化钠水溶液。 7.根据权利要求1～6任意一项所述的试剂盒，其中，所述样本处理液为三羟甲基氨基甲烷水溶液。 8.一种肺炎支原体检测用试剂盒的制备方法，所述试剂盒包括校准品、样本处理液、磁微粒试剂、标记抗体试剂、清洗液和激发物，该制备方法包括以下步骤：样本处理液配置步骤：配置所述样本处理液，校准品制备步骤：配置校准品稀释液，以所述校准品稀释液将重组肺炎支原体稀释为不同浓度的肺炎支原体抗原的校准品，标记抗体试剂制备步骤：使标记物与检测抗体反应，对反应后的混合液进行透析，随后进行稀释，以获得所述标记抗体试剂，清洗液配置步骤：配制所述清洗液，磁微粒试剂制备步骤：使磁微粒活化后，加入抗肺炎支原体单克隆捕获抗体进行包被，随后进行磁性分离，以获得所述磁微粒试剂，激发物制备步骤：配制所述激发物。 9.根据权利要求8所述的试剂盒制备方法，其中，在所述校准品制备步骤中，将所述纯化肺炎支原体稀释为在1×103～1×105CFU/mL范围内2个以上不同浓度的肺炎支原体抗原的校准品。 10.根据权利要求8或9所述的试剂盒制备方法，其中，在所述标记抗体试剂制备步骤中，所述标记物为吖啶酯类化合物，所述吖啶酯类化合物为选自吖啶酯、吖啶酯磺酰胺、吖啶酯甲苯磺酰胺、吖啶酯对甲基磺酰胺和吖啶酯三氟甲基磺酰胺中的一种，并且所述吖啶酯类化合物优选为吖啶酯。 11.根据权利要求8～10任意一项所述的试剂盒制备方法，其中，所述磁微粒的粒径为1～5μm，表面电荷密度为5～50μmol/g。 12.根据权利要求8～11任意一项所述的试剂盒制备方法，其中，在所述激发物制备步骤中，所述激发物溶液包括第一激发物溶液和第二激发物溶液，并且，所述第一激发物为硝酸过氧化氢水溶液，所述第二激发物为氢氧化钠水溶液。 13.根据权利要求8～12任意一项所述的试剂盒制备方法，其中，所述样本处理液为三羟甲基氨基甲烷水溶液。 14.一种使用权利要求1～7任意一项所述的肺炎支原体检测用试剂盒或权利要求8～13任意一项所述的制备方法所制备的肺炎支原体检测用试剂盒来检测肺炎支原体的方法，该检测方法包括以下步骤：样本处理步骤：用样本处理液对采集的样本进行处理，加样反应步骤：在反应管中加入处理后的所述样本、校准品、标记抗体试剂和磁微粒试剂，震荡混匀后，进行孵育；清洗步骤：对孵育后的混合物进行磁性分离，加入清洗液，待所述磁微粒试剂吸附完全后，弃去上清；检测步骤：加入激发物，检测并读取信号值；以及计算步骤：对所述校准品的浓度和发光值进行计算，通过样本RLU值计算所述样本的COI值，并基于所述COI值判断样本的肺炎支原体阴阳性。 15.根据权利要求14所述的检测肺炎支原体的方法，其中，在所述加样反应步骤中，孵育时间为5～15min。
所属类别：	发明专利