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原文传递荧光分子、其制备方法和应用、免疫凝聚试剂盒、其制备方法以及检测抗原的方法

专利名称：	荧光分子、其制备方法和应用、免疫凝聚试剂盒、其制备方法以及检测抗原的方法
摘要：	本发明涉及生物试剂盒领域，具体而言，涉及一种荧光分子、其制备方法和应用、免疫凝聚试剂盒、其制备方法以及检测抗原的方法。荧光分子为具有式(1)结构的化合物或其盐，式(1)如下：其中R为苯环任意位置的氨基，R′为金属卟啉或其类似结构。其具有在一定的范围内自身浓度增加，自身荧光信号快速降低的特性。利用该荧光分子与抗体偶联制备试剂盒，也可利用其自猝灭现象，导致荧光信号快速降低替代浊度的升高，提升检测结果的准确性。且可同时标记多个项目抗体，而后实现不同波长对应不同项目，继而实现同时同管检测多个项目抗原，节约了检测成本和时间，且该荧光物质检测灵敏度高，大大提高了检测试剂的灵敏度与线性范围。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	福建;35
申请人：	迪佰(厦门)生物科技有限公司
发明人：	肖江群;王保丹;钟乾兴
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-11T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-25T00:00:00+0800
申请号：	CN201910290617.4
公开号：	CN109932350A
代理机构：	北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	覃蛟
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	361000 福建省厦门市海沧区翁角西路2074号生物医药产业园B13号楼第7层02单元
主权项：	1.一种荧光分子，其特征在于，其为具有式(1)结构的化合物或其盐，式(1)如下：其中，R为苯环任意位置的氨基，R′为金属卟啉或其类似结构。 2.根据权利要求1所述的荧光分子，其特征在于，所述R′中的金属卟啉选自锌卟啉或者镁卟啉，所述R′的金属卟啉类似结构选自硅酞菁或者锌酞菁。 3.根据权利要求1所述的荧光分子，其特征在于，所述荧光分子的结构式选自下式中的任意一种： 4.一种权利要求1至3任一所述的荧光分子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将对苯二胺与苝四羧酸酐反应得到中间体，而后所述中间体与含有两个羧基并具有金属卟啉类似结构的化合物反应得到所述荧光分子；优选地，含有两个羧基并具有金属卟啉类似结构的化合物选自叶绿素A、羧基硅酞菁，羧基锌酞菁和羧基锌卟啉中的至少一种。 5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，将对苯二胺、苝四羧酸酐和催化剂在氮气保护条件下在分阶段反应后利用二氯甲烷分离反应液得到所述中间体；优选地，所述对苯二胺和所述苝四羧酸酐的摩尔比为2:1-6:1，更优选为3:1；优选地，所述催化剂与对苯二胺的摩尔比为1:(2-5.45)，更优选为，1：3.5；优选地，分阶段反应是在氮气保护下，对苯二胺、苝四羧酸酐、催化剂和溶剂在105-125℃反应3-5小时，而后再在150-190℃的条件下回流10-30小时；更优选，所述溶剂为邻甲基苯酚、间甲基苯酚或者对甲基苯酚中的任意一种。 6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述中间体与所述含有两个羧基并具有金属卟啉类似结构的化合物混合反应后固液分离形成固态中间体；而后所述固态中间体与碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺反应形成所述荧光分子；优选地，所述固态中间体是将所述中间体、所述含有两个羧基并具有金属卟啉类似结构的化合物、偶联剂和DMF在20-50℃条件下反应0.5-3小时后加入水并离心得到的固体；优选地，所述中间体与所述含有两个羧基并具有金属卟啉类似结构的化合物的质量比为1:1-2；更优选为，1:1.25；优选地，所述固态中间体、碳二亚胺和所述N-羟基琥珀酰亚胺在30-45℃条件下反应1-4小时后在-5至-80℃条件下保存；优选地，所述偶联剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N,N'-二异丙基碳二亚胺或二环己基碳二亚胺中的任意一种。 7.权利要求1至3任一所述的荧光分子在荧光检测中的应用；优选地，所述应用为采用所述荧光分子检测抗体或者抗原。 8.一种基于荧光猝灭的免疫凝聚试剂盒，其特征在于，其包括抗体和权利要求1所述的荧光分子偶联得到的偶联物；优选地，所述抗体与所述荧光分子的摩尔比为1:1-1:10，更优选为1:4；优选地，所述抗体选自肺炎支原体抗体、胃蛋白酶原I抗体、乙型肝炎病毒抗体、降钙素原抗体和肌钙蛋白I抗体中的任意一种。 9.一种权利要求8所述的基于荧光猝灭的免疫凝聚试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：将抗体和权利要求1所述的荧光分子进行偶联反应；优选地，按照每毫升抗体溶液对应10-300微升权利要求1所述的荧光分子的溶液将所述抗体溶液和所述荧光分子混合后进行偶联反应；优选地，在偶联反应之前对所述荧光分子进行活化；优选地，活化是按照1毫克所述荧光分子对应0.5-20ml二甲基亚砜将所述荧光分子与所述二甲基亚砜进行混合；而后得到活化后的所述荧光分子的溶液；优选地，所述偶联反应的温度为20-50℃，反应时间为1-8小时；更优选地，反应条件为37℃和4小时；优选地，抗体溶液的浓度为0.1-20mg/ml，更优选为，1mg/ml；优选地，所述荧光分子的溶液的浓度为0.1-20mg/ml，更优选为，1mg/ml；优选地，在偶联反应之后对反应产物进行纯化；优选地，采用G50分子筛进行所述纯化；优选地，纯化包括：将反应产物过G50分子筛，随后采用10mM的PBS溶液作为洗脱液进行洗脱，再收集OD280>0.1的组分。 10.一种利用权利要求8所述的基于荧光猝灭的免疫凝聚试剂盒检测抗原的方法，其特征在于，将待检测样本加入权利要求8所述的基于荧光猝灭的免疫凝聚试剂盒中，而后检测荧光强度。
所属类别：	发明专利