详情

原文传递一种高选择性黄体酮光电化学生物传感器的构建方法

专利名称：	一种高选择性黄体酮光电化学生物传感器的构建方法
摘要：	本发明公开一种高选择性黄体酮光电化学生物传感器的构建方法，所述方法包括下述步骤：S1、制备Fe3O4纳米簇；S2、制备Fe3O4@SiO2纳米复合材料；S3、制备Fe3O4@SiO2@TiO2纳米复合材料；S4、构建光电化学适配体传感器。本发明具有灵敏度高、成本效益低、易于制造和可重复性好等特点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	盐城工学院
发明人：	李静;郭磊;李红波;李艳丽;方海林;王伟
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-02T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201910710171.6
公开号：	CN110297030A
代理机构：	南京先科专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	缪友菊
分类号：	G01N27/327(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	224055 江苏省盐城市世纪大道1166号研创大厦
主权项：	1.一种高选择性黄体酮光电化学生物传感器的构建方法，其特征在于，所述方法包括下述步骤： S1、制备Fe3O4纳米簇； S2、制备Fe3O4@SiO2纳米复合材料； S3、制备Fe3O4@SiO2@TiO2纳米复合材料； S4、构建光电化学适配体传感器：取煅烧过的Fe3O4@SiO2@TiO2纳米复合材料分散于无水乙醇中，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，60-100℃反应1.5-5h，洗涤，得到Fe3O4@SiO2@TiO2-NH2；向活化后的带有羧基的DNA溶液中加入得到的Fe3O4@SiO2@TiO2-NH2，4℃下反应过夜，洗去游离的aptamer，得到Fe3O4@SiO2@TiO2-NH2-aptame，加入cDNA溶液，孵育杂交，洗去游离的cDNA，得到Fe3O4@SiO2@TiO2-aptamer-cDNA复合物，并将其分散于水中；向得到的Fe3O4@SiO2@TiO2-aptamer-cDNA溶液中加入黄体酮溶液进行反应，洗去游离的黄体酮，将反应得到的Fe3O4@SiO2@TiO2-aptamer-cDNA/黄体酮溶液滴涂在ITO导电玻璃上，自然凉干，进行光电化学信号检测。 2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，S4中，带有羧基的DNA溶液的活化方法如下：向带有羧基的DNA溶液中加入1-4mmol/L EDC和3-9mmol/L NHS的混合溶液50-200μL，在15-35℃下活化0.5-2h。 3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，S4中，带有羧基的DNA溶液中，溶剂为pH为6.4-8.4的Tris-HCl溶液。 4.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，S4中，Fe3O4@SiO2@TiO2纳米复合材料与无水乙醇的质量体积比（mg/ml）为3-10：15-50。 5.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，S4中，无水乙醇与3-氨丙基三乙氧基硅烷的体积比为15-50：0.03-0.09。 6.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，S4中，孵育的温度为27-47℃，孵育的时间为0.5-2h。 7.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，S1中，Fe3O4纳米簇的制备方法如下：将NaOH溶解于10-30mL的DEG溶液中，N2保护下，100-150℃下搅拌0.5-2h，得到均匀的NaOH/DEG溶液，将NaOH/DEG溶液于40-80℃下密封保温备用；将聚丙烯酸、FeCl3溶解于10-25mL DEG溶液中，N2保护下，200-240℃剧烈搅拌0.5-2h后，加入备用的NaOH/DEG溶液1.4-2.8mL，继续反应0.5-2h，自然冷却至室温，用乙醇和水洗涤，分散在1.5-5mL水中，得到Fe3O4纳米簇。 8.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，S2中，Fe3O4@SiO2纳米复合材料的制备方法如下：在10-30mL乙醇和0.5-2mL氨水的混合物中加入1.5-5mL的S1中Fe3O4纳米簇的悬浮液，在室温下强力搅拌3-9min后，注入40-100μL的TEOS，反应20-60min，将反应得到的Fe3O4@ SiO2纳米粒子进行离心分离，用乙醇洗涤三次，分散在3-12mL的乙醇中，得到Fe3O4@SiO2纳米复合材料。 9.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，S3中，Fe3O4@SiO2@TiO2纳米复合材料的制备方法如下：将3-12mL的S2中的Fe3O4@SiO2纳米复合材料，10-23mg羟基纤维素，3-12mL乙醇，1.5-8mL乙腈，以及0.05-0.3mL的氨水混合搅拌10-40min后，加入含有0.15-0.55mL的TBOT的乙醇溶液，搅拌1-4h，通过离心收集产生的Fe3O4@SiO2@TiO2纳米颗粒，用乙醇和超纯水洗涤三次后，在含有1.5-3.5mol/L NaOH的10-30mL水中室温蚀刻10-30min，将所得产品先在40-80℃下干燥0.5-2h，再在400-900℃氮气氛围中煅烧1-4h后，分散在3-9mL的乙醇中，得到Fe3O4@SiO2@TiO2纳米复合材料。
所属类别：	发明专利