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一种胰岛素质谱肽图的鉴别方法及应用
| 专利名称： | 一种胰岛素质谱肽图的鉴别方法及应用 |
| 摘要： | 本发明公开了一种胰岛素质谱肽图的鉴别方法及应用。本发明采用V8酶结合V8酶和赖氨酰肽链内切酶联用，特异性水解胰岛素，通过液质联用仪建立含有胰岛素特征性片段的肽图。方法建立：使用缓冲液提供pH7.5～9.5的酶解环境，底物与酶按胰岛素:V8酶:赖氨酰肽链内切酶≈（100～1000）:（100～500）:1的质量比进行反应过夜，反应液稀释10～30倍，采用液相分离质谱检测器检测，建立各品种胰岛素的特征肽图谱。采用本发明的质谱肽图谱，可以准确的确定各种不同胰岛素，方法准确可靠。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 天津;12 |
| 申请人： | 天津市药品检验研究院 |
| 发明人： | 白海娇;韩晓捷;伏圣青;邵建强 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-07-23T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-10-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910663742.5 |
| 公开号： | CN110297050A |
| 代理机构： | 天津市杰盈专利代理有限公司 |
| 代理人： | 朱红星 |
| 分类号： | G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30 |
| 申请人地址： | 300070 天津市和平区贵州路98号天津市药品检验研究院 |
| 主权项： | 1.一种胰岛素质谱肽图的鉴别方法，其特征在于按如下的步骤进行： （1）使用V8酶结合V8酶与赖氨酰肽链内切酶联用酶解方法鉴别各种类胰岛素； （2）V8酶与赖氨酰肽链内切酶联用酶解方法鉴别赖脯胰岛素； （2）水解条件：采用缓冲液pH7.5～9.5的酶解环境；所述的缓冲液指的是Tris-Hcl缓冲液； （3）反应液的配制：按照胰岛素:V8酶:赖氨酰肽链内切酶≈（100～1000）:（100～500）:1的质量比分别配制反应液； （4）色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比0.1%～1%甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，采用梯度洗脱，流速为0.2～0.6ml/min，柱温50～60℃，质谱检测器； （5）色谱梯度条件如下： 表1 流动相梯度洗脱条件(体积比) （6）测定法：取酶解样品注入液质联用仪，进行数据采集，测定酶解多肽片段的质谱图。 2.权利要求书1所述的鉴别方法，其特征在于多种胰岛素在两种酶解条件下的特征质谱肽图，为人胰岛素、门冬胰岛素、甘精胰岛素、谷赖胰岛素、赖脯胰岛素、猪胰岛素、牛胰岛素。 3.权利要求书1所述的鉴别方法，其特征在于胰岛素质谱肽图谱建立包含原料和制剂；所述的原料和制剂指的是：重组人胰岛素原料、生物合成人胰岛素注射液、精蛋白生物合成人胰岛素注射液、精蛋白生物合成人胰岛素注射液（预混30R）、精蛋白生物合成人胰岛素注射液（预混50R）、门冬胰岛素原料、门冬胰岛素注射液、门冬胰岛素30注射液、门冬胰岛素50注射液。 4.权利要求书1所述的鉴别方法，其特征在于质谱检测得到特征肽段。 5.权利要求书1所述胰岛素质谱肽图的鉴别方法在准确快速鉴别胰岛素真伪，鉴别胰岛素具体类别方面的应用。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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