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原文传递一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法

专利名称：	一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法
摘要：	本发明公开了一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法，包括：链霉亲和素磁微粒的制备、链霉亲和素磁微粒悬浮液制备、生物素标记的胎盘生长因子的制备、化学发光物质标记的胎盘生长因子抗体的制备等步骤；本发明中链霉亲和素磁微粒通过链霉亲和素和生物素之间的高亲和力作用，可以绑定任何生物素标记的分子，链霉亲和素磁微粒可用于免疫及分子检测，本发明采用聚苯乙烯磁微粒，具有粒径均一、比表面积大、形貌规整的特点，有利于快捷、高效地捕获目标分子以及实现磁性分离，本发明建立的磁微粒化学发光法具有特异性强、准确快速、检测时间短、检测结果准确、重复性好等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	宁波奥丞生物科技有限公司
发明人：	周义正;唐静;黄丹娣
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-31T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-08T00:00:00+0800
申请号：	CN201910701274.6
公开号：	CN110308287A
代理机构：	北京盛凡智荣知识产权代理有限公司
代理人：	郑丰平
分类号：	G01N33/74(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	315000 浙江省宁波市海曙区望春工业园区春华路885号
主权项：	1.一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)链霉亲和素磁微粒悬浮液制备：取链霉亲和素磁微粒溶液，加入TBST溶液充分混匀后，放置于磁分离器上，直至上清无混浊，弃上清，留取磁微粒，重复清洗5次后，用PBS缓冲液稀释后得到链霉亲和素磁微粒溶液； (2)生物素标记的胎盘生长因子的制备：取胎盘生长因子单克隆抗体，用超滤离心管进行超滤离心，将PBS缓冲液置换为标记缓冲液，进行离心；加入生物素原液，混匀，进行标记；标记反应结束后，加入封闭缓冲液；封闭后用超滤离心管进行超滤离心，超滤结束后，得到生物素标记的胎盘生长因子； (3)化学发光物质标记的胎盘生长因子抗体的制备：取胎盘生长因子单克隆抗体，用超滤离心管进行超滤离心，将PBS缓冲液置换为标记缓冲液，进行离心；加入吖啶酯原液，混匀，进行标记；标记反应结束后，加入封闭缓冲液；封闭后用超滤离心管进行超滤离心，超滤结束后，得到化学发光物质标记的胎盘生长因子抗体； (4)分装步骤1-3制备的试剂，组装成所述试剂盒。 2.如权利要求1所述的一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，包括链霉亲和素磁微粒溶液的制备方法。 3.如权利要求2所述的一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法，其特征在于，所述链霉亲和素磁微粒溶液的制备方法包括：将磁流体和聚乙二醇溶于无水乙醇中，移入带有搅拌器、冷凝管和N2入口的三颈瓶中，N2气氛中，65℃条件下，300r/min搅拌30min,然后升温至70℃，依次加入苯乙烯、马来酸酐、丙烯酸、二乙烯基苯、过氧化苯甲酰，10min后，反应物成乳液状，保持N2气氛，70℃，搅拌速度300r/min，反应时间12h，反应完成后聚苯乙烯磁微粒收集备用；将PBS缓冲液进行高压灭菌，霉亲和素溶于PBS缓冲液中，取200ul装于EP管中待用；将聚苯乙烯磁微粒放入超纯水中浸泡，用PBS缓冲液清洗3次后，再加入PBS缓冲液中，超声分散后得到聚苯乙烯磁微粒分散液；取聚苯乙烯磁微粒分散液，加入的戊二醛室温震荡反应，进行磁分离，用纯水清洗多余的戊二醛3-5次，再次将聚苯乙烯磁微粒悬浮于PBS缓冲液中，然后再加入到装有链霉亲和素容液的EP管中，室温震荡培养，最后将链霉亲和素磁微粒分散在PBS溶液中，4℃保存待用。 4.如权利要求1或3所述的一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法，其特征在于，所述PBS缓冲液的浓度为50mmol/L，pH为7.8。 5.如权利要求1所述的一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法，其特征在于，所述链霉亲和素磁微粒中的磁微粒的粒径为1-3μm。 6.如权利要求1所述的一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法，其特征在于，所述标记缓冲液为20mmol/L PBS，150mmol/L NaCl，pH8.0。 7.如权利要求1所述的一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法，其特征在于，所述封闭缓冲液为20mmol/L PB，150mmol/L NaCl，10％赖氨酸，pH8.0。 8.如权利要求1所述的一种胎盘生长因子的化学发光试剂盒的制备方法，其特征在于，胎盘生长因子抗体与吖啶酯原液的摩尔比为10:1。
所属类别：	发明专利