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原文传递一种多酶信号颗粒及其制备方法与应用

专利名称：	一种多酶信号颗粒及其制备方法与应用
摘要：	本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种多酶信号颗粒及其制备方法与应用，本发明以聚酰胺‑胺树状大分子为模板合成纳米金颗粒，并以其为载体，共价连接抗体和酶分子，构建多酶信号颗粒，并将其用于免疫分析方法中。本申请通过多酶的信号放大机制，能够显著提升检测方法的灵敏度。在本发明优选的技术方案中，基于本发明的多酶信号颗粒制备的免疫层析试纸条，在经过酶显色后，信号显著放大，并可在5‑10分钟内肉眼直接判读检测结果，实现了对待测目标物的快速检测；相比于传统免疫分析方法，具有检测高效、灵敏度更高等优点。同时，检测结果肉眼可判读，具有便捷性和实用性，其应用范围更为广泛。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	江苏大学
发明人：	曾昆;黄哲;韦达理;张旭芸
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-18T00:00:00+0800
申请号：	CN201910555769.2
公开号：	CN110346560A
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	212013 江苏省镇江市京口区学府路301号
主权项：	1.一种多酶信号颗粒的制备方法，其特征在于，所述方法包括：（1）将氯金酸溶液和聚酰胺-胺树状大分子混合搅拌，加入硼氢化钠水溶液，搅拌后离心，离心后沉淀超纯水中分散均匀得到PAMAM-Au纳米颗粒分散液；（2）将步骤（1）中得到的PAMAM-Au纳米颗粒分散液共价偶联抗体，与抗体充分混合后孵育、离心去除多余的抗体，超纯水重悬后加入含有生物素和巯基的DNA链，孵育后离心得到沉淀物；（3）沉淀物超纯水重悬后加入酶标记的亲和素，室温孵育后离心，得到基于聚酰胺-胺树状大分子包裹纳米金的多酶信号颗粒。 2.根据权利要求1所述多酶信号颗粒的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述氯金酸溶液的浓度为20~45mmol/L，所述聚酰胺-胺树状大分子的重量百分浓度为1~3.0 wt%；所述的氯金酸溶液和聚酰胺-胺树状大分子的体积比为1:1~5。 3.根据权利要求1所述多酶信号颗粒的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述聚酰胺-胺树状大分子为2.0代至5.0代中的任意一代，所述聚酰胺-胺树状大分子的末端集团为氨基或羧基，所述聚酰胺-胺树状大分子的核为乙二胺或氨。 4.根据权利要求1所述多酶信号颗粒的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述共价偶联抗体为采用戊二醛法或EDC法连接抗体；所述的抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。 5.根据权利要求1所述多酶信号颗粒的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述的DNA链为生物素和巯基分别修饰于DNA链的两端。 6.根据权利要求1所述多酶信号颗粒的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述的孵育条件均为4~25℃下孵育8~16h。 7.根据权利要求1所述多酶信号颗粒的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述的酶标记的亲和素为辣根过氧化物酶标记的亲和素或碱性磷酸酶标记的亲和素。 8.一种多酶信号颗粒，如权利要求1~7任一项所述制备方法制备得到的，其特征在于，所述的多酶信号颗粒以聚酰胺-胺树状大分子为模板结合氯金酸得到聚酰胺-胺包裹纳米金颗粒，共价偶联抗体、含有生物素和巯基的DNA链以及酶标记的亲和素。 9.一种产品，其特征在于，所述产品包括如权利要求8所述的多酶信号颗粒。 10.如权利要求8所述的多酶信号颗粒在生物检测或医疗检验中的应用，其特征在于，所述的生物检测或医疗检验为免疫分析，所述的免疫分析为侧流层析免疫分析方法、酶联免疫分析法、磁珠免疫分析方法。
所属类别：	发明专利