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原文传递一种丹酚酸的模拟代谢方法

专利名称：	一种丹酚酸的模拟代谢方法
摘要：	本发明属于中药代谢领域，尤其涉及一种丹酚酸的模拟代谢方法。其包括以下步骤：（1）电化学模拟：将丹酚酸标准溶液经电化学氧化后与GSH溶液混合，注入质谱中进行分析表征其代谢产物；（2）肝微粒体外孵育：将大鼠肝微粒体蛋白、氯化镁、β‑NADP和丹酚酸标准品溶解在磷酸盐缓冲溶液中孵育，得到孵育混合物并通过LC‑MS分析表征其代谢产物。该方法克服了现有技术中研究氧化药物代谢的方法复杂且检测灵敏度低的缺陷，采用在线电化学模拟联合飞行时间质谱技术使丹参酚酸成分发生氧化反应，以模拟丹参活性成分在体内中的氧化转化过程，简化了氧化产物的检测，大大提高了灵敏度与重现性，并且该方法快速、简便、可重复，应用前景大，模拟效果可靠。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	杭州师范大学
发明人：	曹君;王秋燕;胡雨涵;杜丽晶;王淑玲
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-03T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-25T00:00:00+0800
申请号：	CN201910477561.3
公开号：	CN110376255A
代理机构：	杭州杭诚专利事务所有限公司
代理人：	尉伟敏
分类号：	G01N27/26(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	310015 浙江省杭州市余杭区余杭塘路2318号
主权项：	1.一种丹酚酸的模拟代谢方法，其特征在于，其包括以下步骤：（1）电化学模拟：称取丹酚酸类标准品配制成标准溶液，将标准溶液经电化学氧化后与GSH溶液混合，注入质谱中进行分析表征其代谢产物；（2）肝微粒体外孵育：将大鼠肝微粒体蛋白和标准品溶解在磷酸盐缓冲溶液中在一定温度下孵育一定的时间，再加入氯化镁和β-NADP孵育一定的时间，孵育后得到孵育混合物并向其中加入乙腈，将其离心后，取上清液通过LC-MS分析表征其代谢产物；（3）比较分析：将步骤（1）与步骤（2）中的代谢产物进行比较。 2.根据权利要求1所述的一种丹酚酸的模拟代谢方法，其特征在于，所述步骤（1）中标准溶液配制方法如下：将100μM丹酚酸类标准品溶解于由50％乙腈和50％水组成的20mM甲酸铵缓冲液中，并通过20-22% LC-MS级氨水调节pH至7.4后摇匀，通过0.22μm滤膜过滤，并转移至注射器中即得。 3.根据权利要求2所述的一种丹酚酸的模拟代谢方法，其特征在于，所述步骤（1）的具体步骤如下：以一定的流速向电化学反应池中注入丹酚酸类标准品溶液，经电化学反应后的流出液流至T-连接处，然后在另一个通道以相同的速率输注GSH溶液至T-连接处，将来自两个通道的流出物在T-连接处混合，并流入质谱仪中，即得相应的代谢产物。 4.根据权利要求1或2或3所述的一种丹酚酸的模拟代谢方法，其特征在于，所述丹酚酸类标准品为迷迭香酸，原儿茶醛，紫草酸，丹酚酸B或丹酚酸C中的任意一种。 5.根据权利要求3所述的一种丹酚酸的模拟代谢方法，其特征在于，所述的流速为10μL/min。 6.根据权利要求3所述的一种丹酚酸的模拟代谢方法，其特征在于，所述的GSH溶液浓度为300μM。 7.根据权利要求1所述的一种丹酚酸的模拟代谢方法，其特征在于，所述步骤（2）的具体步骤如下：将大鼠肝微粒体蛋白和标准品溶解在磷酸盐缓冲溶液中并调节pH至7.4，并在37 ℃下预孵育2~10分钟，随后将氯化镁和β-NADP加入到孵育混合物中，使其在37 ℃下进一步温育60~120分钟，孵育后，通过加入乙腈沉淀蛋白质，以13000rpm离心5 分钟后，通过LC-MS分析上清液。 8.根据权利要求7所述的一种丹酚酸的模拟代谢方法，其特征在于，所述步骤（2）中磷酸盐缓冲溶液的浓度为50mM。 9.根据权利要求7或8所述的一种丹酚酸的模拟代谢方法，其特征在于，所述步骤（2）中孵育混合物中各组分最终浓度如下：1.3 mg/mL大鼠肝微粒体，100µM标准品，0.5mM氯化镁，1.2mM β-NADP。
所属类别：	发明专利