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原文传递检测猕猴血浆中中期因子反义寡核苷酸含量的方法

专利名称：	检测猕猴血浆中中期因子反义寡核苷酸含量的方法
摘要：	本发明公开了一种检测猕猴血浆中中期因子反义寡核苷酸含量的方法，包括：取含有中期因子反义寡核苷酸的待测猕猴血浆，向所述猕猴血浆中加入流感泰德作为内标液，再加入适量氨水溶液、苯酚/二氯甲烷混合液，然后依次剂型涡流好离心，以便得到处理后血样；取所述血样的上清液并进行LC/MS/MS分析；绘制标准曲线，并根据标砖曲线法对所述待测猕猴血浆中所述中期因子反义寡核苷酸的含量进行定量分析。该方法具有专属性高，并且准确度、精密度、回收率和样品冻融稳定性等参数均符合检测要求。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
发明人：	车津晶;原梅;朱小雨;张小差;刘作锋
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-23T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-18T00:00:00+0800
申请号：	CN201910432682.6
公开号：	CN110346493A
分类号：	G01N30/88(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	100085 北京市海淀区海淀太平路27号
主权项：	1.一种检测猕猴血浆中中期因子反义寡核苷酸含量的方法，其特征在于，包括： (1)取含有中期因子反义寡核苷酸的待测猕猴血浆，向所述猕猴血浆中加入流感泰德作为内标液，再加入适量氨水溶液、苯酚/二氯甲烷混合液，然后依次剂型涡流好离心，以便得到处理后血样； (2)取所述血样的上清液并进行LC/MS/MS分析；其中，所述LC/MS/MS分析采用的色谱条件如下：色谱柱：WatersMS C18色谱柱，2.1mm×50mm；流动相A：HFIP和EA的混合水溶液；流动相B：HFIP与TEA的混合甲醇水溶液；流速：200μL/min；洗脱程序：所述LC/MS/MS分析采用的质谱条件如下：以高纯氮气作为碰撞气、气帘气、ESI源负离子扫描，MRM扫描方式；质谱条件为：碰撞气：12；气帘气：10；离子源1：40；离子源2：70；离子电离电压：-4500；温度：200；模式：ESI(-)；检测物参数 (3)绘制标准曲线，并根据标砖曲线法对所述待测猕猴血浆中所述中期因子反义寡核苷酸的含量进行定量分析。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流感泰德的浓度为100μg/mL，所述流感泰德的加入量为所述待测猕猴血浆的25体积％。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述氨水的浓度为5％，所述氨水的加入量为所述待测猕猴血浆的2.5体积％。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述苯酚/二氯甲烷混合液中苯酚与二氯甲烷的体积比为1∶1，所述苯酚/二氯甲烷混合液的加入量与所述待测猕猴血浆体积比为1∶1。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述涡流时间为10min；所述离心是在15000rpm/min的条件下进行5min。 6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相A为200mM HFIP和2.85mM TEA的混合水溶液。 7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相B为200mM HFIP和2.85mM TEA的甲醇水溶液，所述甲醇水溶液中甲醇与水的体积比为60∶40。 8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标砖曲线的线性范围为0.18-200μg/mL。 9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法的最低检测限为0.18μg/mL。 10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于，所述待测猕猴血浆中的所述中期因子反义寡核苷酸是通过对猕猴注射中期因子反义寡核苷酸纳米制剂获得的。
所属类别：	发明专利