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原文传递一种血浆中异橙黄酮含量的检测方法

专利名称：	一种血浆中异橙黄酮含量的检测方法
摘要：	本发明提供了一种血浆中异橙黄酮含量的检测方法，属于药物分析领域。本发明建立了一种基于沉淀法和液质联用技术的血浆中异橙黄酮检测方法，可用于检测生物体内的异橙黄酮浓度，为临床和基础研究提供可靠的分析手段，本发明使用蛋白质沉淀法处理含异橙黄酮的血浆样品，通过一步沉淀反应去除杂质和内源性干扰物，在高效液相色谱的分离过程中，向流动相中加入了一定的甲酸，使异橙黄酮在电离后形成更多的加氢的准分子离子峰，对应的特征性碎片离子的丰度随之升高，提高了检测得灵敏度；在定量的过程中，以石吊兰素为内标物，通过准分子离子峰→子离子的特异性的、高灵敏度的监测实现对异橙黄酮的定量检测。
专利类型：	发明专利
申请人：	温州医科大学附属第二医院、温州医科大学附属育英儿童医院
发明人：	叶炜剑;牛超;孙佳;陈根;黄晓忠
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T13:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN202010031715.9
公开号：	CN111198235A
代理机构：	北京高沃律师事务所
代理人：	王术娜
分类号：	G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72
申请人地址：	325027 浙江省温州市鹿城区学院西路109号
主权项：	1.一种血浆中异橙黄酮含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将含异橙黄酮的血浆、石吊兰素的甲醇溶液以及乙腈混合进行沉淀反应，将所得上清液进行液质联用检测，用内标法以标准曲线计算血浆中异橙黄酮的含量，所述标准曲线以异橙黄酮的浓度为横坐标，以异橙黄酮和石吊兰素的峰面积比值为纵坐标；所述液质联用检测的高效液相色谱条件包括：色谱柱为安捷伦ZORBAX Eclipse PlusC18 RRHD色谱柱，采用梯度洗脱，流动相A为含0.1vol％甲酸的水溶液，流动相B为乙腈，洗脱程序为0～0.5分钟，流动相B的体积百分含量从95％下降到5％；0.5～1.5分钟，流动相B的体积百分含量保持为95％；1.5～1.6分钟，流动相B的体积百分含量从5％上升到95％；1.6～3.5分钟，流动相B的体积百分含量保持为95％，流速为0.6mL/min，柱温为20℃，进样量为2μL；所述液质联用检测的质谱条件包括：使用三重四级杆质谱仪，离子源为电喷雾离子源，采用正离子模式，采用多反应监测扫描模式，所述异橙黄酮的离子对为373.1→343.1和373.1→153.1，所述离子对373.1→343.1为定量离子对，所述离子对373.1→153.1为定性离子对，所述石吊兰素的离子对为345.1→315.1，所述异橙黄酮的碰撞能量为29eV，所述石吊兰素的碰撞能量为28eV，干燥气流速为10L/h，干燥气温度为350℃，雾化气压力为45psi。 2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述含异橙黄酮的血浆、石吊兰素的甲醇溶液以及乙腈的体积比为30:3:500，所述石吊兰素的甲醇溶液的浓度为2.5μg/mL。 3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述沉淀反应后还包括将所得沉淀反应产物在14000g条件下离心10分钟。 4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述标准曲线由包括以下步骤的方法制得：称量1mg异橙黄酮，用甲醇溶解得到1mg/mL的异橙黄酮母液，用甲醇将所述异橙黄酮母液稀释成10、40、150、600、2500、5000和10000ng/mL的标准曲线工作液，分别将3μL所述标准曲线工作液加到微型离心管中，然后通入氮气将溶剂挥干，接着使用30μL空白血浆复溶异橙黄酮，得到1、4、15、60、250、500和1000ng/mL的标准曲线样品，将所述标准曲线样品、石吊兰素的甲醇溶液以及乙腈混合进行沉淀反应，将所得上清液进行液质联用检测，使用内标法对所得数据进行处理，以异橙黄酮的浓度为横坐标，异橙黄酮和石吊兰素的峰面积比值为纵坐标，以1/x2为权重系数，利用加权最小二乘法进行线性回归，得到所述标准曲线。
所属类别：	发明专利