原文传递
一种牡蛎内源肽的提取和鉴定方法
| 专利名称： | 一种牡蛎内源肽的提取和鉴定方法 |
| 摘要： | 本发明主要公开一种牡蛎内源肽的提取和鉴定方法。该方法根据肽组学技术对牡蛎进行前处理并提取牡蛎中的内源肽，获得待测多肽滤液；通过超高相液相色谱‑质谱法测定所获得的多肽滤液；对得到的质谱数据进行在线数据库比对，鉴定肽段；通过合成部分肽段并使用液相色谱‑三重四级杆质谱建立的多反应监测分析方法，验证肽段序列的正确性以及用做常规液质分析的适用性。本发明针对性的提出牡蛎内源肽的提取与鉴定方法，并首次利用质谱技术分离鉴定了多种牡蛎内源性肽，完善了牡蛎天然物质数据库，为牡蛎内源肽的进一步研究提供了基础。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 山东;37 |
| 申请人： | 中国海洋大学 |
| 发明人： | 李兆杰;陈李品;张晓梅;张鸿伟;仇文峰;唐庆娟;薛长湖 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-08-06T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-10-18T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910721301.6 |
| 公开号： | CN110346479A |
| 代理机构： | 青岛海昊知识产权事务所有限公司 |
| 代理人： | 刘艳青 |
| 分类号： | G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30 |
| 申请人地址： | 266100 山东省青岛市崂山区松岭路238号 |
| 主权项： | 1.一种牡蛎内源肽的提取和鉴定方法，其特征在于，该方法包括如下步骤： 对牡蛎进行前处理并提取牡蛎中的内源肽，获得待测多肽滤液； 通过超高相液相色谱-质谱法测定所获得的多肽滤液； 对步骤（2）得到的质谱数据进行在线数据库比对，鉴定肽段； 通过合成部分肽段并使用液相色谱-三重四级杆质谱建立的多反应监测分析方法，验证肽段序列的正确性以及用做常规液质分析的适用性。 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤（1）前处理包括如下步骤： (1) 牡蛎去壳取可食部位进行液氮速冻后均质，灭酶，待用；向灭酶后的牡蛎粉末样品加入碳酸氢铵溶液，离心，收集上清，得肽粗提液； (2)向上述肽粗提液中加入二硫基苏糖醇，水浴振摇反应，然后冷却至室温； (3)向步骤（2）反应后的溶液中加入碘代乙酰胺溶液，室温避光反应； (4)将步骤（3）反应后的溶液使用固相萃取小柱脱盐处理； (5)对除盐后的溶液进行冻干处理，得到肽段； (6)冻干后的粉末状样品复溶； (7)在进一步上机分析之前，将反应液转移到超滤膜的离心管，超滤离心，收集下层的待测多肽滤液，待上机检测。 3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在上述步骤（2）中超高相液相色谱-质谱法采用AB SCIEX TripleTOF® 5600检测。 4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，上述步骤（3）使用ProteinPilot软件，检索NCBI中牡蛎的蛋白数据库，对质谱检测结果进行比对分析。 5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，上述步骤（4）验证内源肽结构的方法中，所述的质谱法检测为：采用AB SCIEX 5500三重四级杆检测。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
检索历史
应用推荐
