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原文传递一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒及其制备方法

专利名称：	一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒及其制备方法
摘要：	本发明涉及胸苷激酶检测技术领域，具体是公开了一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒，所述试剂盒采用双抗体夹心法人血清中TK1的含量，所述试剂盒包括公共液体、包被载体和工作液；所述公共液体包括化学发光底物、终止液和浓缩洗涤液，所述载体采用微孔板，所述工作液包括酶结合物、结合抗体、质检品和校准品。本发明克服了现有技术的不足，采用化学发光法进行检测，将检测周期控制在50min，操作简单方便，灵敏度大大提高，试验盒的实验结果稳定，重复性高。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	安徽;34
申请人：	安徽恩禾生物技术有限公司
发明人：	余旭亮
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-18T00:00:00+0800
申请号：	CN201910579052.1
公开号：	CN110346569A
代理机构：	合肥律众知识产权代理有限公司
代理人：	冯慧云
分类号：	G01N33/573(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	230000 安徽省合肥市高新区创新大道106号明珠产业园5#5层D区
主权项：	1.一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒采用双抗体夹心法人血清中TK1的含量，所述试剂盒包括公共液体、包被载体和工作液；所述公共液体包括化学发光底物、终止液和浓缩洗涤液，所述载体采用微孔板，所述工作液包括酶结合物、结合抗体、质检品和校准品。 2.根据权利要求1所述的一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒，其特征在于：所述酶结合物采用辣根过氧化物酶作为标记酶，所述化学发光底物采用DAB显色液，所述DAB显色液包括显色液A和显色液B。 3.一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒的制备方法，其特征在于：包括如下步骤： (1)制备包被载体；抗TK1抗体用包被缓冲液稀释，取待包被微孔板，将经过稀释的抗TK1抗体负载于微孔板上，包被结束后，吸去包被缓冲液，再加入封闭液，置于37℃封闭3小时或在室温下封闭过夜；弃去封闭液，干燥包被载体后加入干燥剂密封包装，得到抗TK1抗体包被载体。 (2)制备公共液体： A、制备终止液：终止液为pH7.2、6mmol/L的苏木精染色液； B、制备DAB显色液；显色液A为pH7.2、10mmol/L的Tris-HCl溶液，显色液B为pH6.0、10mmol/L的过氧化氢溶液； C、制备浓缩洗涤液；浓缩洗涤液为pH7.2-7.4、20mmol/L PBS缓冲液； (3)制备标准品和质控品；用稀释液与人体血清按体积比3∶1比例混合配制成基础缓冲液，用基础缓冲液将抗TK1抗体稀释成浓度为100、80、60、40、20、0ng/mL标准品；用基础缓冲液将抗TK1抗体稀释成浓度为100ng/mL高值质控品和50ng/mL低值质控品。 (4)组装试剂盒；将标准品和质控品、包被载体、公共液体经过半成品分装经过半成品质检后组装成胸苷激酶化学发光法检测试剂盒。 4.根据权利要求3所述的一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒，其特征在于：步骤1中包被缓冲液为pH7.2、10mmol/L的磷酸盐溶液，所述封闭液为pH7.4、20mmol/L的PBST溶液，内含1％BSA、0.1％Proclin300以及3％蔗糖。 5.根据权利要求3所述的一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒，其特征在于：所述步骤2中显色剂A和显色剂B按照1:1的比例混合使用，现用现配。 6.根据权利要求3所述的一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒，其特征在于：所述步骤3中稀释液为pH7.4、20mmol/L PBS溶液。 7.根据权利要求3所述的一种胸苷激酶化学发光法检测试剂盒，其特征在于：所述步骤4中采用滴配实验的方式进行半成品检测，检测合格的产品再进行组装。 8.一种利用权利要求1所述的试剂盒检测胸苷激酶含量的检测方法，其特征在于：包括如下步骤： 1)加入待测样品，100μL/孔，37℃孵育60min； 2)加酶：每孔加入两滴或100ul的酶标记物； 3)温育：用封口膜将条板封好(防止污染),37℃温育60分钟； 4)洗板：取出反应板，甩尽板中液体，洗板5次，拍干，在洗涤过程中应避免产生气泡； 5)每孔加入显色剂A、B溶液各一滴或各50ul，充分混匀； 6)测定：用半自动发光仪，测定各孔OD.值； 7)结果计算：以校准品浓度作横坐标，OD.值作纵坐标。通过标本的OD.值可在标准曲线上查出其浓度。
所属类别：	发明专利