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原文传递用于早期检测肾移植术后发生免疫排斥反应的血液中生物标记物及其用途

专利名称：	用于早期检测肾移植术后发生免疫排斥反应的血液中生物标记物及其用途
摘要：	本发明提供了一种用于早期检测肾移植术后发生免疫排斥反应的血液中生物标记物及其用途。所述生物标记物为血液经过微波酸水解和阴离子交换色谱‑脉冲安培法得到的岩藻糖和甘露糖，本发明的技术方案具有降解快速、批通量、兼容性、酸用量少、操作步骤简单易学，并且具有灵敏度高、准确性好等优点。所得结果显示此降解分析方法可以快速降解血样，分析血样中的单糖组成，并可以计算得到其单糖浓度，根据其浓度可以识别肾移植后排斥反应风险特别高的患者，从而帮助量身定制治疗方案和进行定期随访检查。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	青岛大学附属医院
发明人：	张丽娟;何燕利
专利状态：	有效
申请日期：	2018-04-04T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-18T00:00:00+0800
申请号：	CN201810296880.X
公开号：	CN110346458A
代理机构：	青岛合创知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	王晓晓
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	266000 山东省青岛市市南区江苏路16号
主权项：	1.用于早期检测肾移植术后发生免疫排斥反应的血液中生物标记物，其特征在于：所述生物标记物为血液经过微波酸水解和阴离子交换色谱-脉冲安培法得到的岩藻糖和甘露糖。 2.根据权利要求1所述的用于早期检测肾移植术后发生免疫排斥反应的血液中生物标记物，其特征在于：所述生物标记物岩藻糖的浓度为50.53 μmol/L以下，是未进行肾移植人群岩藻糖浓度的0.77倍以下；甘露糖的浓度为1197 μmol/L以下，是未进行肾移植人群甘露糖浓度的0.83倍以下。 3.根据权利要求2所述的用于早期检测肾移植术后发生免疫排斥反应的血液中生物标记物，其特征在于：所述生物标记物岩藻糖浓度为60.10±43.68 μmol/L、甘露糖浓度为824.0±246.1 μmol/L；未进行肾移植人群中岩藻糖浓度为78.48±47.09 μmol/L、甘露糖浓度为986.2±402.6μmol/L。 4.根据权利要求1所述的用于早期检测肾移植术后发生免疫排斥反应的血液中生物标记物，其特征在于：所述的微波酸水解和阴离子交换色谱-脉冲安培法包括以下具体步骤： (1) 取待检测的血液或血浆样品至微波水解管，加入水，混匀后再加入HCl得到溶解液； (2) 将所述溶解液使用单模微波蛋白水解仪进行微波酸水解； (3) 微波酸水解后的样品用水转移到离心管中，离心浓缩除酸； (4) 然后向离心后的样品中添加甲醇，离心浓缩除残留HCl； (5) 将离心后的干燥样品用水溶解，离心取上清液； (6) 将所述上清液用于阴离子交换色谱分析； (7) 绘制岩藻糖和甘露糖的标准曲线； (8) 将步骤(6)得到的色谱图与步骤(5)中的标准曲线比对并分析计算，确定岩藻糖和甘露糖的浓度。 5.根据权利要求4所述的用于早期检测肾移植术后发生免疫排斥反应的血液中生物标记物，其特征在于：所述步骤(1)中血液样品选用2 μL。 6.根据权利要求4所述的用于早期检测肾移植术后发生免疫排斥反应的血液中生物标记物，其特征在于：所述步骤(1)中HCl的浓度为3 mol/L。 7.根据权利要求4所述的用于早期检测肾移植术后发生免疫排斥反应的血液中生物标记物，其特征在于：所述步骤(2)中微波酸水解的条件为功率80 w-100 w，温度80 ℃-100℃，水解时间5 min-15 min。 8.根据权利要求7所述的用于早期检测肾移植术后发生免疫排斥反应的血液中生物标记物，其特征在于：所述微波酸水解的条件为功率100 w、温度100 ℃、水解时间10 min。 9.根据权利要求1所述的用于早期检测肾移植术后发生免疫排斥反应的血液中生物标记物，其特征在于：所述步骤(6)中的色谱条件为：分析柱：Thermo Scientific Dionex Carbo PACTM PA10, 4.0 mm×250 mm；保护柱：Thermo Scientific Dionex Carbo PACTM PA10, 4.0 mm×50 mm；淋洗液：0-18 min 18 mM NaOH；流速：1.0 mL/min，进样体积：10 μL，柱温：30 ℃，检测器：电化学检测器，金电极，标准糖电位，运行时间：18 min。 10.权利要求1所述的生物标记物在制备用于检测肾移植术后发生免疫排斥反应的试剂中的用途，其特征在于：所述试剂中包括浓度为60.10±43.68 μmol/L的岩藻糖和浓度为824.0±246.1 μmol/L的甘露糖的标准液。
所属类别：	发明专利