详情

原文传递一种基于分子信标适配体的Hg2+检测方法

专利名称：	一种基于分子信标适配体的Hg2+检测方法
摘要：	本发明提供一种基于分子信标适配体的Hg2+检测方法，涉及Hg2+检测技术领域。所述Hg2+检测方法主要包括分子信标适配体的设计、缓冲体系的制备、对照组和实验组的设立、检测、建立标准曲线、定量分析等步骤。本发明克服了现有技术的不足，应用分子信标适配体中的T碱基与Hg2+形成了T‑Hg2+‑T的结构，核酸适配体和Hg2+的特异性结合引发了核酸适配体的构象改变，从而拉大荧光基团和猝灭基团之间的距离，因此荧光强度增大的原理，提升检测的灵敏度，方便检测人员观察检测，并且检测过程中各溶液配置简便，方便使用，减少人力物力，适宜推广使用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广东石油化工学院
发明人：	张强;王丽;迟恩忠
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-22T00:00:00+0800
申请号：	CN201910523651.1
公开号：	CN110361369A
代理机构：	合肥汇融专利代理有限公司
代理人：	邝溯琼
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	525000 广东省茂名市官渡二路139号大院
主权项：	1.一种基于分子信标适配体的Hg2+检测方法，其特征在于，所述Hg2+检测方法包括以下步骤： (1)分子信标适配体的设计：设计由29个碱基组成的单链DNA探针，其中DNA探针含5′末端和3′末端相靠近的茎环发夹结构，且5′末端标记FAM，3′末端标记DABCYL； (2)缓冲体系的制备：制备pH为8.1，Na+浓度为40mmol/L，Mg2+浓度为10mmol/L的缓冲体系，备用； (3)对照组和实验组的设立：向缓冲体系中加入一定浓度的上述分子信标适配体，再加入待检测含Hg2+溶液，混匀后形成实验组备用，向缓冲体系中加入与实验组同等浓度和体积的分子信标适配体，混匀后形成对照组备用； (4)检测：将上述对照组和实验组同等条件下进行孵育，后检测各组中荧光强度，计算荧光强度的变化； (5)建立标准曲线，确定最低检出限和线性范围； (6)根据标准曲线对实验组进行定量分析。 2.根据权利要求1所述的一种基于分子信标适配体的Hg2+检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中单链DNA探针从5′端至3′的序列为GAACACCCCCTTCTTCTTCCTTGTTGTTC。 3.根据权利要求1所述的一种基于分子信标适配体的Hg2+检测方法，其特征在于：所述分子信标适配体的浓度为0.08μmol/L。 4.根据权利要求1所述的一种基于分子信标适配体的Hg2+检测方法，其特征在于：所述步骤(3)实验组中添加的缓冲体系、分子信标适配体和待检测含Hg2+溶液与对照组中缓冲体系、分子信标适配体的添加量均为添加同等体积量。 5.根据权利要求1所述的一种基于分子信标适配体的Hg2+检测方法，其特征在于：所述对照组和实验组的孵育时间为10min。 6.根据权利要求1所述的一种基于分子信标适配体的Hg2+检测方法，其特征在于：所述步骤(4)中的检测方法为分别取对照组和实验组体积为100μL的检测样液，加入黑色96孔板，在多功能读板机上进行，且激发波长为485nm、发射波长为535nm。 7.根据权利要求1所述的一种基于分子信标适配体的Hg2+检测方法，其特征在于：所述步骤(5)中建立标准曲线的方式为以荧光强度的变化值为纵坐标，Hg2+的浓度为横坐标绘制标准曲线。
所属类别：	发明专利