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原文传递泛素酶功能性匹配的筛选方法及应用

专利名称：	泛素酶功能性匹配的筛选方法及应用
摘要：	本发明公开了泛素酶功能性匹配的筛选方法及应用，包括配制2×待测酶样品液及2×反应混合液；在96孔板的反应孔中进行孵育；在反应孔中加入10μLAMP‑Glo试剂，进行孵育；加入20μL AMP检测液，进行孵育；测发光强度。本发明中的泛素酶有效匹配的筛选方法可提供更高的准确度和可信度，所有的反应步骤均在同一个96孔板中均相完成，无需洗涤，分离等步骤，整个方案的完成只需约3个小时，因而具有更强的可操作性；另外，由于使用化学发光值作为最终结果的读出，本方案具有极高的灵敏度，从而从很大程度上减少了酶的用量，降低了研究成本；且本发明中还提供了泛素酶有效组合图谱，是当前所知第一次基于体外泛素化反应所获得的该类功能性图谱。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	苏州新格诺康生物技术有限公司
发明人：	姚晓晖;苏妙贤;来棽棽;谢志伟;严俊
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-22T00:00:00+0800
申请号：	CN201910806085.5
公开号：	CN110361377A
分类号：	G01N21/76(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	215000 江苏省苏州市工业园区星湖街218号生物纳米园A7楼203室
主权项：	1.泛素酶功能性匹配的筛选方法，其特征在于，泛素酶功能性匹配的筛选方法包括以下步骤： S1、配制2×待测酶样品液及2×反应混合液； S2、在96孔板的反应孔中加入S1中所配得的溶液各5μl，并进行孵育； S3、在反应孔中加入10μL AMP-Glo试剂，在室温的条件下进行孵育； S4、加入20μl AMP检测液，在室温的条件下进行孵育； S5、对S4中所制得的溶液的发光强度进行读取。 2.根据权利要求1所述的泛素酶功能性匹配的筛选方法及应用，其特征在于，所述2×待测酶样品液的制备方法包括步骤： S1、配制50mmol/L的Tris-HCI缓冲液，并在该缓冲液中加入MgCl2使其最终浓度为5mmol/L，调节pH值至7.5； S2、使用前，在S1中所制得的溶液中加入0.5mmol/L的DTT； S3、在S2中所制得的溶液中加入RanBP2酶贮存液液至RanBP2最终浓度为200nmol/L，制备成2×待测酶样品液。 3.根据权利要求1所述的泛素酶功能性匹配的筛选方法及应用，其特征在于，所述2×反应混合液的制备方法包括以下步骤： S1、配制50mmol/L的Tris-HCI缓冲液，并在该缓冲液中加入MgCl2使其最终浓度为5mmol/L，调节pH值至7.5； S2、使用前，在S1中所制得的溶液中加入0.5mmol/L的DTT； S3、在S2中所制得的溶液中加入20nmol/L的SAE1/UBA2、500nmol/L的UBE2I、40μmol/L的SUMO1和50μmol/L的ATP，制备成2×反应混合液。 4.根据权利要求1所述的泛素酶功能性匹配的筛选方法及应用，其特征在于，所述S2中的孵育温度为37℃，孵育时间为60分钟。 5.根据权利要求1所述的泛素酶功能性匹配的筛选方法及应用，其特征在于，所述S3中的孵育时间为60分钟。 6.根据权利要求1所述的泛素酶功能性匹配的筛选方法及应用，其特征在于，所述S4中的孵育时间为40分钟。 7.一种如权利要求1所述泛素酶功能性匹配的筛选方法可用于对相关酶组分进行泛素化催化反应的研究。
所属类别：	发明专利