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原文传递一种通用快速DNA产品中RNA残留定量方法

专利名称：	一种通用快速DNA产品中RNA残留定量方法
摘要：	本发明公开了一种通用快速DNA产品中RNA残留定量方法，该方法使用特异性核酸酶结合RNA特异性荧光染料定量检测RNA。该方法具体为：特异性核酸酶消化DNA保留RNA，消除干扰，然后使用RNA特异性荧光染料定量检测RNA残留；或者，特异性核酸酶消化RNA后使用RNA特异性荧光染料定量检测RNA，计算消化前后差值来定量检测RNA残留。相比于常规AGE定性检测，本发明方法为定量检测，由于RNA特异荧光染料对RNA灵敏度高，且理论上受RNA碎片长度差异的影响小，故本发明定量线性好、灵敏度高，受RNA碎片化干扰小、准确性好；相比于常规RT‑qPCR间接RNA残留定量，本方法直接对RNA残留定量，实验流程简单、快速，成本低，理论上直接对RNA定量更准确，对实验人员要求低。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	无锡生基医药科技有限公司
发明人：	王胜亚;梁焯;姚树元
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-22T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-29T00:00:00+0800
申请号：	CN201910659162.9
公开号：	CN110389230A
代理机构：	上海市汇业律师事务所
代理人：	王函
分类号：	G01N33/58(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	214000 江苏省无锡市惠山经济开发区惠山大道1719-6号一层A区
主权项：	1.一种通用快速DNA产品中RNA残留定量方法，其特征在于，该方法使用特异性核酸酶结合RNA特异性荧光染料定量检测RNA。 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法具体为：特异性核酸酶消化DNA保留RNA，消除相对高浓度DNA的干扰，然后使用RNA特异性荧光染料定量检测RNA残留；或者，特异性核酸酶消化RNA后使用RNA特异性荧光染料定量检测RNA，计算消化前后差值来定量检测RNA残留。 3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述特异性核酸酶选自以下任意一种：DNaseI和RNaseInhibitors的混合物；RNase A。 4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述特异性核酸酶为DNase I和RNaseInhibitors的混合物。 5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述RNA特异性荧光染料选自以下任意一种：Qubit RNA检测试剂盒系列产品，BiotiumAccuBlue RNA定量产品。 6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述RNA特异性荧光染料为QubitRNAHS试剂盒产品。 7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述特异性核酸酶为DNase I和RNaseInhibitors的混合物,DNase I终浓度为1U/µL，所述RNA特异性荧光染料为QubitRNAHS试剂盒。 8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述特异性核酸酶与RNA样品混合，37℃消化30min，然后各取反应液与预先配制好的RNA特异性荧光染料混合，室温放置5min，Qubit 4型荧光定量仪以RNA HS模式读取RFU，各组分别读取2次，余下反应液进行AGE定性检测。 9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述计算消化前后差值来定量检测RNA残留，使用如下公式即可得到DNA样品中RNA残留量：其中，Mock组：10µL TE Buffer（RI），10µL DNase I Mix； pDNA（RNA）组：10µLpDNA（RNA），10µL DNase I Mix； pDNA组：10µLpDNA，10µL DNase I Mix； TE Buffer（RI）：99µLTEBuffer，1µLRNase Inhibitor； DNase I Mix：3.2µL DNase I，16µL 10X Reaction Buffer with MgCl2，0.8µL RNaseInhibitors，60µL H2O（Nuclease-Free）。
所属类别：	发明专利