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原文传递一种全自动串联固相萃取植物中油菜素甾醇的方法

专利名称：	一种全自动串联固相萃取植物中油菜素甾醇的方法
摘要：	本发明公开了一种采用全自动串联固相萃取方法用于植物中油菜素甾醇的分析前处理。该方法采用全自动在线固相萃取装置，串联两个固相萃取柱，对植物样品提取液进行在线净化、提纯，并与色谱进样在线联用，解决了传统离线样品前处理过程中样品损失较大的难题。两种固相萃取柱的在线串联使用，可以提高净化效率，减小色谱分析的基质效应，提高分析选择性。同时，两个固相萃取柱在使用后可以在线再生，重复使用多次，降低了分析成本，节省了分析时间。方法还集成了在线衍生功能，有利于提高检测灵敏度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	辽宁;21
申请人：	中国科学院大连化学物理研究所
发明人：	段春凤;关亚风;李玉璇;倪兰秀
专利状态：	有效
申请日期：	2018-04-13T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-25T00:00:00+0800
申请号：	CN201810332157.2
公开号：	CN110376320A
代理机构：	沈阳科苑专利商标代理有限公司
代理人：	马驰
分类号：	G01N30/08(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	116023 辽宁省大连市沙河口区中山路457号
主权项：	1.一种全自动串联固相萃取植物中油菜素甾醇的方法，其特征在于：采用全自动在线固相萃取装置进行固相萃取，所述全自动在线固相萃取装置具有双组压头，分别夹紧固相萃取柱A和固相萃取柱B；所述固相萃取柱A填充的固体吸附剂为C8或C18键合硅胶颗粒；所述固相萃取柱B填充的固体吸附剂为混合型阳离子交换吸附剂与混合型阴离子交换吸附剂的等质量组合；固相萃取柱A和固相萃取柱B为圆柱体，沿柱体中心轴开设有一个贯穿上下两端的圆形通孔，通孔内填充固体吸附剂；柱体上下两端设有与柱体紧密结合的筛板将填料封装在通孔内；所述固相萃取柱A和固相萃取柱B的两端面与全自动在线固相萃取装置的压头尺寸相匹配；所述全自动在线固相萃取装置内有一个两位八通阀和一个六通阀或四通阀，所述六通阀或四通阀位于八通阀与色谱柱之间，六通阀或四通阀的①号位与八通阀的⑦号位相连；六通阀或四通阀的②号位与色谱柱相连，六通阀或四通阀的③号位为流动相入口；六通阀的④号位和⑤号位为空；六通阀的⑥号位或四通阀的④号位连接废液瓶；所述八通阀的①号位与固相萃取柱A的上压头相连，固相萃取柱A的下压头与八通阀的⑤号位相连；八通阀的④号位与固相萃取柱B的上压头相连，固相萃取柱B的下压头与八通阀的⑥号位相连；八通阀的③号位为再生液入口，②号位与废液瓶相连，⑧号位为液体入口；所述在线固相萃取的具体步骤包括： a)活化：固相萃取前，八通阀的⑧号位与①号位相通，六通阀或四通阀的②号位与③号位相通；活化液从八通阀的⑧号位进入，依次流经固相萃取柱A和固相萃取柱B对其进行活化； b)上样：八通阀和六通阀或四通阀的阀位与步骤a相同；用液相色谱自动进样器定量吸取含油菜素甾醇的植物样品提取液，在上样溶液推动下，使植物样品提取液经八通阀⑧号位进入，加载到固相萃取柱A的柱头，油菜素甾醇被保留在固相萃取柱A上；所述上样溶液与植物提取液的溶剂条件相同；提取液全部进入固相萃取柱A后停止上样； c)洗脱衍生：八通阀阀位与步骤a相同，六通阀或四通阀的①号位与②号位相通，驱动洗脱溶剂从八通阀的⑧号位进入，依次流经固相萃取柱A和固相萃取柱B，将油菜素甾醇洗脱下来所述洗脱溶剂为含有衍生试剂的流动相，洗脱过程中进行衍生，洗脱液直接进入色谱柱； d)分离再生：进样完成后，切换八通阀和六通阀或四通阀，此时八通阀的③号位与④号位相通；再生液从③号位进入，依次流经固相萃取柱B和固相萃取柱A，对其进行再生；此时六通阀或四通阀的①号位与②号位相通，色谱流动相直接进入色谱柱进行分离分析。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述全自动在线固相萃取装置内有一个两位八通阀和一个六通阀，所述六通阀位于八通阀与色谱柱之间；所述六通阀的②号位与⑤号位之间连接有一个衍生反应管，用于在线衍生油菜素甾醇；六通阀的③号位为流动相入口，④号位连接色谱柱；所述步骤a、b和c中六通阀的④号位与③号位相通；所述步骤c中，驱动衍生液从八通阀的⑧号位进入，依次流经固相萃取柱A和固相萃取柱B，将固相萃取柱A上保留的油菜素甾醇洗脱下来并带入衍生反应管内停流一段时间进行衍生；所述衍生液为含衍生试剂和5％～10％(v/v)吡啶的乙腈溶液；待衍生反应结束后，执行步骤d，切换八通阀和六通阀，此时六通阀的③号位与②号位相通，色谱流动相将衍生反应管内的衍生产物推送至色谱柱进行分离分析。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述衍生试剂为氨基苯硼酸，浓度为0.5～2.0mg/L；所述流动相为体积浓度为60％～100％的乙腈-水溶液；所述植物样品提取液所采用的提取溶剂为乙腈、甲醇、80％(v/v)乙腈-水溶液、80％(v/v)甲醇-水溶液中的任一种。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述活化液和再生液为乙腈或甲醇中的任一种。 5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述衍生反应管外部设有加热装置，发生衍生反应时，衍生反应管的温度为65℃～75℃；所述步骤c中液体在衍生反应管内停留的时间为20s～60s。 6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述衍生试剂为萘基苯硼酸、菲硼酸、蒽硼酸、萘基蒽硼酸中的任一种；衍生试剂的浓度为0.5～2.0mg/L；所述流动相为体积浓度为60％～100％的乙腈-水溶液。 7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述固相萃取柱A和固相萃取柱B的通孔直径为1mm～3mm，内部填充的固体吸附剂的体积为6.3μL～70μL，填充体积为通孔容积的80％～100％。 8.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述活化液的流速为0.5mL/min～1mL/min；上样溶液的流速为0.1mL/min～1.0mL/min；洗脱溶剂和衍生液的流速为0.5mL/min～1.5mL/min；再生液的流速为0.5mL/min～1.5mL/min。 9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述衍生反应管为石英盘管，内容积为100微升～300微升。
所属类别：	发明专利