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原文传递一步法检测氟虫腈残留的VHH-ELISA试剂盒及其应用

专利名称：	一步法检测氟虫腈残留的VHH-ELISA试剂盒及其应用
摘要：	本发明公开了一步法检测氟虫腈残留的VHH‑ELISA试剂盒及其应用，所述试剂盒包括盒体、设在盒体内的酶标板以及试剂；其中，酶标板的每个孔包被有氟虫腈包被抗原，所述试剂包括抗氟虫腈VHH‑AP基因工程抗体、氟虫腈标准溶液、缓冲液PBS、洗涤液PBST、显色液和反应终止液等。检测过程中，酶标板孔壁上吸附的包被抗原和待测氟虫腈相互竞争与抗体反应，通过显色反应观察结果。本发明的优点是能准确灵敏地检测鸡肉、鸡蛋中氟虫腈残留，样品的前处理过程简单，耗时少，能同时检测大量的样品，样品检测成本远低于传统的仪器检测方法。与传统ELISA试剂盒相比，样品检测所需时间大大缩短。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	苏州微测生物技术有限公司
发明人：	许艇;王楷;徐波杰;周航;李季;韩跃国
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-25T00:00:00+0800
申请号：	CN201910674886.0
公开号：	CN110376372A
代理机构：	苏州谨和知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	叶栋
分类号：	G01N33/541(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	215000 江苏省苏州市吴中区长蠡路366号
主权项：	1.抗氟虫腈VHH-AP基因工程抗体，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。 2.一步法检测氟虫腈残留的VHH-ELISA试剂盒，包括盒体、设在盒体内可拆卸的酶标板以及设在盒体内的试剂，其特征在于，所述酶标板的每个孔包被有氟虫腈包被抗原，所述试剂包括权利要求1所述抗氟虫腈VHH-AP基因工程抗体、氟虫腈标准溶液、缓冲液PBS、洗涤液PBST、显色液和反应终止液。 3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述氟虫腈包被抗原的制备方法如下： (1)称8.8mg 6-(3-氰基-5-(2,6-二氯-4-(三氟甲基)苯基)环戊-1,3-二烯-1-基)氨基)-6-氧代己酸(氟虫腈-6C，化学结构式如图2所示)、2.65mg NHS、4.8mg DCC溶于200μL无水DMF中，室温下搅拌反应过夜；将反应液离心，弃沉淀，上清液为活性酯； (2)称20mg BSA溶于0.05mol/mL pH 9.5的碳酸盐缓冲溶液2mL中，搅拌下逐滴加入150μL上述活性酯，20～30min加完；然后室温下继续搅拌反应4～6h； (3)反应液装入透析袋内，用0.01mol/L pH7.4的PBS透析；每6～8h换液一次，共换液5～6次；透析后离心，弃沉淀，取上清液作为抗原包被液。 4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标板为96孔酶标板，包被抗原的包被浓度为165ng/mL。 5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述抗氟虫腈VHH-AP基因工程抗体的浓度为100ng/mL。 6.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述显色液由甘氨酸7.51g、MgCl2·6H2O0.203g、ZnCl2 0.136g、对硝基苯磷酸二钠1g和蒸馏水1000mL配制而成，pH 10.4。 7.根据权利要求2～6任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述反应终止液为3M的氢氧化钠。 8.氟虫腈VHH-ELISA检测试剂，其有效成分为权利要求1所述抗氟虫腈VHH-AP基因工程抗体。 9.权利要求2-7任一项所述试剂盒或权利要求8所述试剂在ELISA法检测样品中氟虫腈残留的应用。
所属类别：	发明专利