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原文传递一种检测氟虫腈的试剂盒及其制备方法和应用

专利名称：	一种检测氟虫腈的试剂盒及其制备方法和应用
摘要：	本发明公开了一种检测氟虫腈的试剂盒及其制备方法与应用。本发明所提供的氟虫腈检测试剂盒包括氟虫腈酶标板、氟虫腈标准品工作液、氟虫腈抗体工作液、酶标记物工作液、底物液、终止液，还包括式I所示的氟虫腈半抗原与载体蛋白偶联所得的抗原。本发明所提供的氟虫腈检测试剂盒，操作简单、快速，灵敏度高、特异性强、准确性强，对于畜禽产品中氟虫腈残留快速检测具有重大价值。式I。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京维德维康生物技术有限公司
发明人：	马立才;聂靖东;刘薇;邢维维;吴雨洋
专利状态：	有效
申请日期：	2017-10-23T00:00:00+0800
发布日期：	2019-04-30T00:00:00+0800
申请号：	CN201710990416.6
公开号：	CN109696548A
分类号：	G01N33/577(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100095 北京市海淀区北清路156号环保示范园9号院3号楼
主权项：	1.一种氟虫腈的检测试剂盒，包括：氟虫腈酶标板、氟虫腈标准品工作液、氟虫腈抗体工作液、酶标记物工作液、底物液、终止液，其特征在于：所述氟虫腈酶标板由氟虫腈抗原包被制成，所述氟虫腈抗原是由氟虫腈半抗原与载体蛋白偶联所得的抗原，氟虫腈半抗原为式I所示化合物：式I。 2.根据权利要求1所述的一种氟虫腈的检测试剂盒，其特征在于，所述化合物为氟虫腈和巯基丙酸反应得到的，该半抗原含有活性羧基，可以与载体蛋白偶联形成包被原和免疫原。 3.根据权利要求1所述的一种氟虫腈的检测试剂盒，其特征在于，所述化合物的制备方法包括如下步骤：将50ml圆底烧瓶冲洗干净，用乙醇吹干，将其固定在搅拌器上；称取原料1g，用10ml甲醇溶解，呈黄色，搅拌，加入365mg 3-巯基丙酸，搅拌，点板检测反应，纯化，柱层析纯化，收集产物点所在溶液，旋干，即得氟虫腈半抗原。 4.根据权利要求1所述的一种氟虫腈的检测试剂盒，其特征在于，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白、血蓝蛋白、鼠血清蛋白、甲状腺蛋白或兔血清蛋白。 5.根据权利要求1所述的一种氟虫腈的检测试剂盒，其特征在于，所述氟虫腈抗原的制备方法包括如下步骤：（1）将所述氟虫腈半抗原（式I）溶解于二甲基甲酰胺中，然后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，20-25℃磁力搅拌反应2-3h，得到溶液I；其中，所述氟虫腈半抗原（式I）、所述二甲基甲酰胺、所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、所述N-羟基琥珀酰亚胺的配比为15.93mg：1.5mL：21.5mg：13mg；（2）将所述载体蛋白置于0.1M碳酸氢钠缓冲液中，200rpm搅拌10min，充分溶解，得到溶液II；所述载体蛋白与所述0.1M碳酸氢钠缓冲液的配比为33.6-50mg：3.5mL；（3）将所述溶液I和所述溶液II混合，具体为在0-4℃条件下，1000rpm搅拌下，将溶液I逐滴加入到所述溶液II中，500rpm搅拌反应24h，得到溶液III；（4）用磷酸盐缓冲液（0.01M PBS，pH7.2），于4℃对所述溶液III搅拌透析3天，得到所述氟虫腈抗原。 6.一种氟虫腈的检测试剂盒的制备方法，其特征在于：（1）试剂盒中所述氟虫腈标准品溶液的浓度分别为0 µg/L、0.3 µg/L、0.9µg/L、2.7 µg/L、8.1 µg/L和 24.3 µg/L；（2）试剂盒中所述氟虫腈酶标板；（3）试剂盒中所述氟虫腈抗体工作液，为抗体稀释液将抗体进行1:8000稀释，抗体稀释液为含6%,山羊血清的0.2MPBS；（4）试剂盒中所述酶标记物工作液，为经辣根过氧化酶标记的羊抗鼠的抗体；（5）试剂盒中所述样品稀释液，为20×（0.03 mol/L-0.05 mol/L）的磷酸盐缓冲液；（6）所述试剂盒中所述洗涤液，由终浓度为0.8％～1.2％的吐温20、终浓度为0.5％叠氮化钠的组成，溶剂为0.01 M磷酸盐缓冲液；所述终浓度为各物质在洗涤液中的浓度；所述洗涤液的pH值为7.40.01M pH7.4的PBST溶液；（7）试剂盒中所述底物液包括由A液和B液组成， A液为终浓度为1.5％-2.5%的过氧化脲的水溶液，所述终浓度为过氧化脲在所述A液中的浓度；B液为终浓度为0.5％-1.5%的四甲基联苯胺的水溶液，所述终浓度为四甲基联苯胺在所述B液中的浓度；（8）终止液：1瓶（7mL），为2 M H2SO4溶液。 7.根据权利要求1或6所述的氟虫腈检测试剂盒的应用，其特征在于检测样本可以为组织、内脏、肉制品、牛奶、鸡蛋，所述检测上述样本中氟虫腈的检测限为1μg/L。
所属类别：	发明专利