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原文传递一种酸枣仁对照提取物及其制备方法和应用

专利名称：	一种酸枣仁对照提取物及其制备方法和应用
摘要：	本发明公开了一种酸枣仁对照提取物及其制备方法和应用，所述提取物浅褐色干燥粉末，其是由含重量百分比酸枣仁提取物67‑84％和辅料16‑33％组成，其中酸枣仁提取物中含有斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B含量总和不低于4％；该酸枣仁对照提取物一致性好、性状稳定、均匀，可用于酸枣仁药材、酸枣仁制剂的质量控制，对有效化合物定性定量的分析测定。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广州万正药业有限公司
发明人：	许艺镌;巫少娟;郭隆钢;许舜军
专利状态：	有效
申请日期：	2018-04-13T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-25T00:00:00+0800
申请号：	CN201810330287.2
公开号：	CN110376318A
代理机构：	北京君尚知识产权代理有限公司
代理人：	余长江
分类号：	G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	510663 广东省广州市萝岗区科学城芳草甸路2号
主权项：	1.一种酸枣仁对照提取物，其特征在于，述提取物为浅褐色干燥粉末，其是由含重量百分比酸枣仁提取物67-84％和辅料16-33％组成，其中酸枣仁提取物中含有斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B含量总和不低于4％。 2.如权利要求1所述的酸枣仁对照提取物，其特征在于，酸枣仁对照提取物所述斯皮诺素的含量≥3.0％，酸枣仁皂苷A的含量≥1.0％，酸枣仁皂苷B的含量≥1.0％。 3.如权利要求1所述的酸枣仁对照提取物，其特征在于，所述酸枣仁提取物的薄层色谱中，366nmUV下可以看到斯皮诺素以及高于斯皮诺素的一条荧光条带，其他几个黄酮条带相对颜色浅；喷加1％香草醛浓硫酸试剂后直接在白光下观察看到两条明显的蓝色条带，从下到上为酸枣仁皂苷A、B和含量较少的显蓝色的皂苷条带；对照提取物薄层色谱指纹图谱条带和高效液相指纹图谱色谱峰与药材对应一致。 4.如权利要求1所述的酸枣仁对照提取物，其特征在于，所述辅料为微粉硅胶、药用淀粉中一种或两种。 5.如权利要求1所述的一种酸枣仁对照提取物，其特征在于，是通过下述方法制备得到的：步骤1.脱脂酸枣仁：取酸枣仁粉末，用石油醚脱脂即得或脱脂酸枣仁药材市购；步骤2.酸枣仁干膏：取不同来源及批次的脱脂酸枣仁药材粉末，用50-95％乙醇提取提取液滤过，蒸干得到酸枣仁干膏；步骤3.酸枣仁提取物：酸枣仁干膏溶解于甲醇，再加入辅料搅拌均匀、蒸干、研磨过筛即得酸枣仁提取物；步骤4.酸枣仁对照提取物：将不同来源或批次的酸枣仁提取物进行调配勾兑，得到酸枣仁对照提取物。 6.如权利要求4所述的一种酸枣仁对照提取物，其特征在于，步骤1.前增加不同酸枣仁药材来源的筛选步骤：将不同来源或批次的原料药材以薄层色谱法和/或高效液相色谱法进行检测；然后对不同来源或批次的原料药材的通过薄层色谱法和/或高效液相色谱法得到的色谱图和/或测定的斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B含量进行比较分析，剔除色谱图和/或测定的含量异常的原料药材，保留色谱图和/或测定的含量一致的原料药材进行下一步的脱脂酸枣仁的制备；或者在步骤3.与步骤4.之间还包括以薄层色谱法和/或高效液相色谱法对不同批次的酸枣仁提取物的斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B进行检测的步骤。 7.如权利要求5所述的一种酸枣仁对照提取物，其特征在于，步骤1中脱脂酸枣仁药材粉末与50-95％乙醇的重量体积比为1:8～1:50；回流提取1-3次，每次1-3小时；步骤2中甲醇用量为2-5倍干膏重量；步骤3中所述的调配具体指：将不同来源或批次的酸枣仁提取物进行调配，应使最终的酸枣仁对照提取物中对应原药材比例为1：(2-5)g/g，其中含量以wt％计所述斯皮诺素的含量≥3.0％，酸枣仁皂苷A的含量≥1.0％，酸枣仁皂苷B的含量≥1.0％。 8.如权利要求5或7中所述的一种酸枣仁对照提取物，其特征在于：所述步骤1中脱脂方法为，酸枣仁粉末，用石油醚加热回流1-3次，每次1-3小时，过滤后，药渣再用石油醚冲洗1-3次，合并石油醚提取液和洗涤液，干燥，蒸干石油醚即得脱脂酸枣仁粉末。 9.如权利要求6所述的一种酸枣仁对照提取物，其特征在于，所述酸枣仁提取物的薄层色谱法和/或高效液相色谱法检测方法，包括如下步骤：其中薄层色谱法包括如下步骤： (1)化学对照品溶液：精密称取酸枣仁皂苷A、B，斯皮诺素对照品，用甲醇配制成1mg/ml的溶液即可； (2)酸枣仁提取物溶液：精密称定适量提取物对照品，用甲醇配制成60mg/ml的浓度，过0.45μm滤膜即可； (3)所述薄层色谱法检测条件为：薄层板:硅胶G60板展开缸:双槽展开缸点样:提取物溶液、化学对照品溶液点样量均为2μl；自动点样器条状点样，条带8×1mm 展开剂:水饱和的正丁醇展距:上行8cm，温度:20℃左右；相对湿度:<50％检视:展开完毕，挥干薄层板面溶剂，将薄层板放置在真空干燥箱中干燥3h以上，取一块薄层板喷加5％AlCl3乙醇溶液，105℃加热3min后于UV366nm下观察以斯皮诺素为主的黄酮类成分的荧光色谱图像；另一块薄层板于相对湿度不超过50％，温度不超过25℃的环境中浸渍1％香草醛70％浓硫酸乙酸乙酯溶液，迅速在白光下观察酸枣仁皂苷a及酸枣仁皂苷b的天蓝色条斑；其中高效液相色谱法包括如下步骤： (1)化学对照品溶液的制备：精密称取酸枣仁皂苷A、B以及斯皮诺素，用甲醇溶解酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B各配制成0.1mg/ml，和斯皮诺素0.2mg/ml的对照品溶液， (2)酸枣仁提取物供试品溶液的制备：取酸枣仁提取物，精密称定，加甲醇超声处理15min，滤过，配制成8mg/ml浓度的溶液，摇匀，滤过，取续滤液，即得， (3)色谱条件：所述的高效液相色谱法检测条件：色谱仪器：高效液相色谱仪，配有DAD检测器、ELSD检测器色谱柱：C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；斯皮诺素流动相检测波长：335nm柱温35℃ 皂苷A和B流动相载气流速1.60SLM，温度85℃，Gain值9，流动相流速：1.0mL/min (4)检测方法：精密吸取提取物溶液，对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图及计算含量。 10.一种酸枣仁药材或酸枣仁制剂或酸枣仁或含酸枣仁有效成分的药材或制剂的质量控制方法，其特征在于，将权利要求1中所述的酸枣仁对照提取物、待测样品以薄层色谱法和/或高效液相色谱法进行检测，对比判别，其中薄层色谱法包括如下步骤： (1)化学对照品溶液：精密称取酸枣仁皂苷A、B，斯皮诺素对照品，用甲醇配制成1mg/ml的溶液即可； (2)酸枣仁对照提取物溶液：精密称定适量对照提取物，用甲醇配制成60mg/ml的浓度，过0.45μm滤膜即可； (3)待测样品：药材或含酸枣仁制剂：取样品脱脂，用甲醇回流提取1-3次，每次1-3小时，过滤，滤液蒸干用甲醇溶解即可；薄层板:硅胶G60板展开缸:双槽展开缸点样:提取物对照品溶液、药材供试品溶液点样量均为2μl；自动点样器条状点样，条带8×1mm 展开剂:水饱和的正丁醇展距:上行8cm，温度:20℃左右；相对湿度:<50％检视:展开完毕，挥干薄层板面溶剂，将薄层板放置在真空干燥箱中干燥3h以上，取一块薄层板喷加5％AlCl3乙醇溶液，105℃加热3min后于UV366nm下观察以斯皮诺素为主的黄酮类成分的荧光色谱图像；另一块薄层板于相对湿度不超过50％，温度不超过25℃的环境中浸渍1％香草醛70％浓硫酸乙酸乙酯溶液，迅速在白光下观察酸枣仁皂苷a及酸枣仁皂苷b的天蓝色条斑；其中高效液相色谱法包括如下步骤： (1)化学对照品溶液的制备：精密称取酸枣仁皂苷A、B以及斯皮诺素，用甲醇溶解酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B各配制成0.1mg/ml，和斯皮诺素0.2mg/ml的对照品溶液； (2)酸枣仁对照提取物供试品溶液的制备：取酸枣仁对照提取物取，精密称定，加甲醇超声处理15min，滤过，配制成8mg/ml浓度的溶液，摇匀，滤过，取续滤液，即得； (3)待测样品：药材或含酸枣仁制剂脱脂，脱脂后用50-95％乙醇加热回流每次1-3次，每次1-3小时，过滤，滤液蒸干，残渣用甲醇溶解即可；色谱条件：所述的高效液相色谱法检测条件：色谱仪器：高效液相色谱仪，配有DAD检测器、ELSD检测器色谱柱：C18柱250mm×4.6mm，5μm；斯皮诺素流动相检测波长：335nm 柱温35℃，酸枣仁皂苷A和B流动相载气流速1.60SLM，温度85℃，Gain值9，流动相流速：1.0mL/min； (4)检测方法：精密吸取化学对照品溶液，酸枣仁对照提取物溶液、待测样品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图及计算含量。
所属类别：	发明专利