详情

原文传递一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法

专利名称：	一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法
摘要：	本发明公开了一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，四种注射用头孢噻呋钠产品在1日龄黄鸡体内的药代动力学特征，每种药物选用1日龄健康雏鸡，每只皮下注射0.1mg的头孢噻呋钠，以高效液相色谱法检测血浆中去呋喃甲酰基头孢噻呋(DFC)浓度，研究其在1日龄黄鸡体内的药代动力学，实现了我们对于头孢噻呋钠在1日龄黄鸡体内药代动力学的研究。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	温氏食品集团股份有限公司
发明人：	李川川;吴志玲;覃健萍;鲁俊鹏;王占新;张桂君
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-05T00:00:00+0800
申请号：	CN201910505899.5
公开号：	CN110412147A
代理机构：	广州容大专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	刘新年
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	527400 广东省云浮市新兴县新城镇东堤北路9号
主权项：	1.一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，其特征在于：包括如下步骤: S1.选取1d龄黄鸡，向每只黄鸡注射头孢噻呋钠，采取心脏血，分离血浆置于低温备用； S2.对S1中采取的心脏血进行高效液相色谱分析； S3.心脏血样品处理，包括： S31.取心脏血样品，加入二硫赤鲜醇溶液进行提取；取出提取液，静置后加入碘乙酰胺溶液，进行衍生处理，然后酸化，取上清液备用； S32.将S31中的上清液进行萃取，取萃取液并用高效液相色谱外标法测定DCA含量； S4.建立检测方法，包括： S41.色谱专属性检测；取空白血浆，添加头孢噻呋标准工作液，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定； S42.建立标准曲线和计算线性范围；取头孢噻呋标准工作液，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定，将去呋喃羰基头孢噻呋乙酰胺的色谱峰面积对应的药物浓度作线性回归，计算回归方程和相关系数； S43.测定检测限与定量限；取空白血浆，添加头孢噻呋标准工作液，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定，以最低检出浓度计算，信噪比S/N≥3时的样品浓度为检测限，信噪比S/N≥10时的样品浓度为定量限； S44.测定回收率；取头孢噻呋标准工作液，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定；取空白血浆，添加头孢噻呋标准工作液，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定，以样品中DCA峰面积与标准溶液中的DCA峰面积之比，求得回收率； S45.测定精密度；取空白血浆，添加头孢噻呋标准工作液，后按照S2、S3步骤进行处理和测定，上机检测，同一天内，重复测样5次，连续测定3天，计算日内和日间的变异系数； S46.样品处理和数据分析；根据HPLC测得药物峰面积代入标准曲线，计算得到药物浓度，再根据药物浓度-时间数据，计算出药动学参数。 2.根据权利要求1所述的一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，其特征在于：在所述S1中，选用黄鸡，且均为公鸡。 3.根据权利要求2所述的一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，其特征在于：将所有鸡随机分为实验组和对照组，每只颈部皮下注射头孢噻呋钠，分别于5min、15min、30min、45min、1h、2h、4h、8h、12h、24h、36h、48h和72h后采血，每个时间点随机取若干只雏鸡每只心脏采血，置于肝素化的离心管中，混匀，离心分离后置于低温备用；对照组若干只，注射等量生理盐水，采用同样方法采血和分离血浆。 4.根据权利要求1所述的一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，其特征在于：在所述S2中，对心脏血采用液相色谱柱进行色谱分析，所述液相色谱柱的检测波长为266nm，柱温为30℃，流速为1.0mL/min；流动相A液为三氟乙酸水溶液，B液为乙腈。 5.根据权利要求1所述的一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，其特征在于：在所述S31中，取心脏血样品在室温下自然解冻，摇匀，量取0.2-0.6mL的心脏血样品置于离心管中，加入0.6-1.3mL质量百分比为2％的DTE溶液，摇匀，放入恒温震荡水槽仪中在40-55℃下水浴n；取出，静置至室温，加入0.36-0.44mL质量百分比为10％的碘乙酰胺溶液，摇匀，用锡纸包好后置于恒温震荡水槽仪中在20-36℃下水浴衍生20-40min，衍生后的混合液体加入60-100μL质量百分比为20％的磷酸酸化，加入水混匀，2-6℃条件下，转速离心，取上清液备用。 6.根据权利要求5所述的一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，其特征在于：在所述S32中，采用MCX固相萃取柱预先依次用色谱纯甲醇、水活化，将所述上清液过萃取柱，保持流速1-2mL/min，再依次用甲醇、水淋洗，真空抽干，加入乙酸铵-乙腈的混合洗脱液，所述乙酸铵-乙腈的体积比为85:15，所得洗脱液用0.41-0.48μm微孔滤膜过滤，取过滤液进样，采用高效液相色谱外标法测定DCA含量。 7.根据权利要求1所述的一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，其特征在于：在所述S41中，取空白血浆，添加0.03-0.06mL浓度为10μg/mL的头孢噻呋工作液，使得样品中头孢噻呋的质量浓度为1.25μg/mL，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定；取空白血浆，添加0.2-0.5mL浓度为1.25μg/mL的头孢噻呋工作液，然后按照S2、S3步骤进行处理和测定。 8.根据权利要求1所述的一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，其特征在于：在所述S42中，分别量取0.2-0.45mL浓度分别为0.125μg/mL、0.5μg/mL、1.25μg/mL、2.5μg/mL和12.5μg/mL的头孢噻呋标准工作液，按照S2、S3步骤进行处理和测定，上机浓度对应为0.05μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL和5μg/mL，最后将去呋喃羰基头孢噻呋乙酰胺的色谱峰面积对应的药物浓度作线性回归，计算回归方程和相关系数。 9.根据权利要求1所述的一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，其特征在于：在所述S43中，取空白血浆，添加0.02-0.06mL浓度分别为1μg/mL、1.6μg/mL、2μg/mL、3μg/mL、4μg/mL的头孢噻呋标准工作液，按照S2、S3步骤进行处理和测定，样品的对应上机浓度分别为0.05μg/mL，0.08μg/mL，0.1μg/mL，0.15μg/mL，0.2μg/mL。 10.根据权利要求1所述的一种头孢噻呋钠在鸡体内的药代动力学和消除检测方法，其特征在于：在所述S44中，取0.2-0.6mL浓度为0.125μg/mL、1.25μg/mL和12.5μg/mL的头孢噻呋标准工作液，按照S2、S3步骤进行处理和测定，标准溶液衍生化后的0.05μg/mL、0.5μg/mL和5μg/mL，并对所述质量浓度样品设若干个平行样，采用相同方法处理；取空白血浆，添加0.02-0.06mL浓度分别为1μg/mL、10μg/mL和100μg/mL的头孢噻呋标准工作液，使样品中头孢噻呋浓度分别为0.125μg/mL、1.25μg/mL和12.5μg/mL，按照S2、S3步骤进行处理和测，上机对应浓度为0.05μg/mL、0.5μg/mL和5μg/mL并对所述质量浓度样品设3个平行样，采用相同方法处理；以样品中DCA峰面积与标准溶液衍生化后上机测定的DCA峰面积之比，求得回收率。
所属类别：	发明专利