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原文传递一种生物活性药物的药代动力学分析方法

专利名称：	一种生物活性药物的药代动力学分析方法
摘要：	本发明属于药代动力学领域，具体公开了一种生物活性药物的药代动力学分析方法，包括以下步骤：S1.称取待分析生物活性药物，配制成其说明书规定的标准浓度；S2.使用缓冲溶液将原料药溶液分别稀释成不同浓度，并将10份不同浓度的溶液作为系列标准溶液，以原料药溶液的总浓度作为标示量，计量各标准溶液中各组分的相对浓度百分比；所述系列标准溶液的相对浓度分别为1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30%、50%、100%，直至S8根据药物浓度‑时间数据，计算出药动学参数，在计算药动学参数时，采用药动学软件WinNonlin5.2.1软件模拟拟合；本发明所公开的药代动力学分析方法，测试简便，重现性好，适合大分子生物活性药的药代动力学实验分析。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	苏州莱奥生物技术有限公司
发明人：	张卫军
专利状态：	有效
申请日期：	2021-12-18T00:00:00+0800
发布日期：	2022-03-25T00:00:00+0800
申请号：	CN202111556156.4
公开号：	CN114236010A
代理机构：	苏州市方略专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	石磊
分类号：	G01N30/02;G01N30/72;G16B5/00;G;G01;G16;G01N;G16B;G01N30;G16B5;G01N30/02;G01N30/72;G16B5/00
申请人地址：	215400 江苏省苏州市太仓市沙溪镇昭溪路101号太仓星药港4幢4层
主权项：	1.一种生物活性药物的药代动力学分析方法，其特征在于，所述生物活性药物为多肽类药物，包括以下步骤： S1.称取待分析生物活性药物，配制成其说明书规定的标准浓度； S2.使用缓冲溶液将原料药溶液分别稀释成不同浓度，并将10份不同浓度的溶液作为系列标准溶液，以原料药溶液的总浓度作为标示量，计量各标准溶液中各组分的相对浓度百分比；所述系列标准溶液的相对浓度分别为1%、2%、3%、4%、5%、10%、20%、30% 、50%、100%； S3.经静脉注射的方式给予受试动物由步骤S2制备的溶液，收集动物血液样品于聚乙烯管中，并进行血液样品的处理得到血浆样品；使用血浆样品和系列标准溶液制成相应的血浆溶液；所述受试动物为重量为10-20g的无胸腺裸鼠，所述收集动物血液样品于聚乙烯管中，并进行血液样品的处理，获得血浆； S4.于S3得到的血浆中加入0.1-0.3mg固体半胱氨酸封闭剂，涡流混匀，进行半胱氨酸的封闭处理，得到反应液； S5.经半胱氨酸封闭的反应液中加入200-400μL消化缓冲液，涡流混合，再加入4-6μL胰酶溶液，涡流混合，孵育得到血浆样品酶解液； S6，于酶解液中加入1～3μL稳定同位素标记的特征肽段和内标肽段，涡流混匀，将所述特征肽段和所述内标肽段混合酶解； S7.使用液相色谱串联质谱仪将酶解后的反应液进行液相色谱-质谱分析，将所选的特征性肽段峰面积与内标肽段峰面积比值代入标准曲线，得生物活性药物浓度； S8.根据药物浓度-时间数据，计算出药动学参数，在计算药动学参数时，采用药动学软件WinNonlin5.2.1软件模拟拟合。 2.根据权利要求1所述的一种生物活性药物的药代动力学分析方法，其特征在于，所述步骤S3中，所述在进行静脉注射前，对无胸腺裸鼠进行1-2月培养，具体培养条件为：无菌环境下，设定培养室的温度为26-30℃，培养湿度为45-60％，并且培养室中光照为12h明暗交替。 3.根据权利要求1所述的一种生物活性药物的药代动力学分析方法，其特征在于，所述步骤S3中，所述进行血液样品的处理具体包括：分别于给药后的0.25h、0.5h、1h、2h、4h、12h、16h、24h、32h、48h、96h对无胸腺裸鼠的血液进行采集，具体为左手抓住小鼠颈部皮肤，轻压在实验台上，取侧卧位，左手食指尽量将小鼠眼周皮肤往颈后压，使眼球突出；用眼科弯镊迅速夹去眼球，将鼠倒立，用器皿接住流出的血液；采血完毕立即用纱布压迫止血；每次采血量0.2～0.5ml；吸取血液样品于加有乙二胺四乙酸二钠抗凝的离心管中，静置20min，然后在4℃环境下进行10-12min离心，离心转速为3000rpm，分离血浆，得到血浆样品。 4.根据权利要求1所述的一种生物活性药物的药代动力学分析方法，其特征在于，所述步骤S3中，所述使用血浆样品和系列标准溶液制成相应的血浆溶液具体为：分别取不同浓度的系列标准溶液10μL置于离心管中，分别置于氮吹仪中水浴40℃吹干；吹干后加入血浆样品10μL，涡旋混合5min，依次加入5μL内标工作液、100μL甲醇，混合均匀，置于高速离心机中16000rpm离心10min得到上清液；上清液置于离心管中，置于氮吹仪中水浴40℃吹干，在吹干的残渣中加入100μL甲醇复溶，涡旋45s，再次离心得到上清液，即血浆溶液。 5.根据权利要求1所述的一种生物活性药物的药代动力学分析方法，其特征在于，所述步骤S6中，所述特征肽段和内标肽段所含的稳定同位素标记是针对所述特征肽段和内标肽段中的脯氨酸的N和C元素分别进行15N和13C标记。 6.根据权利要求1所述的一种生物活性药物的药代动力学分析方法，其特征在于，所述步骤S7中，所述液相色谱-质谱分析中的液相色谱条件为：采用Antibodix™ NP10色谱柱，所述色谱柱的规格为4.6mm×250mm，10μm；柱温为35-40℃；流动相A为甲酸体积百分数占0.25～0.45％的水；流动相B为甲酸体积百分数占0.25～45％的乙腈；进行梯度洗脱50～60min，进样量为20-40μl，流速为1-2ml/min。 7.根据权利要求1所述的一种生物活性药物的药代动力学分析方法，其特征在于，所述液相色谱-质谱分析中质谱分析的条件为：雾化压力为75～85psi，鞘气温度370～400℃，毛细管电压4700～5300V。 8.如权利要求1-7所述的生物活性药物的药代动力学分析方法在单克隆抗体药物研发中的应用。 9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述单克隆抗体药物为抗PD-L1药物。
所属类别：	发明专利