详情

原文传递用于预测生物制剂的药代动力学和脑渗透性的体外基于细胞的测定

专利名称：	用于预测生物制剂的药代动力学和脑渗透性的体外基于细胞的测定
摘要：	本公开涉及可用于测量分子的转胞吞作用或再循环的方法和组合物。特别地，本公开涉及用于评估治疗性抗体分子和Fc融合蛋白在人和动物中的清除速率的体外受体依赖性转胞吞作用或再循环测定。
专利类型：	发明专利
申请人：	基因泰克公司
发明人：	刘畅;J·H·N·罗易;钟山
专利状态：	有效
申请日期：	2022-04-12T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-28T00:00:00+0800
申请号：	CN202280028580.8
公开号：	CN117136306A
代理机构：	北京坤瑞律师事务所
代理人：	封新琴
分类号：	G01N33/50;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/50
申请人地址：	美国加利福尼亚州
主权项：	1.一种方法，其包括确定多个分子的再循环，其中所述确定包括：将所述多个分子引入第一腔室，其中：所述第一腔室与第二腔室通过细胞层分隔，并且所述第一腔室和所述第二腔室包含水溶液；在所述第一腔室中孵育所述多个分子；更换所述第一腔室和所述第二腔室两者中的所述水溶液；以及测量从所述细胞层释放到所述第一腔室中的所述多个分子的量；其中所述水溶液处于生理pH，并且所述细胞层包含表达介导分子输运的受体的细胞。 2.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞层包括细胞单层。 3.根据权利要求1或2所述的方法，其中介导分子输运的所述受体为转铁蛋白受体、Fc受体、巨蛋白或立方蛋白。 4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中介导分子输运的所述受体为新生儿Fc受体(FcRn)。 5.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述细胞为马丁-达比犬肾(MDCK)细胞。 6.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中测量从所述细胞层释放的所述多个分子的量包括使用酶联免疫吸附测定(ELISA)、液体闪烁计数(LSC)、定量PCR、荧光读取器系统或质谱法。 7.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述多个分子为含有Fc的分子。 8.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述多个分子为抗体。 9.根据权利要求4所述的方法，其中所述FcRn选自由人RcRn、小鼠FcRn、大鼠FcRn和食蟹猕猴FcRn组成的组。 10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其进一步包括测量所述多个分子跨所述细胞层的转胞吞作用。 11.根据权利要求10所述的方法，其中测量所述转胞吞作用包括：在所述第一腔室和所述第二腔室两者中的所述水溶液已更换后，测量所述第二腔室中的所述多个分子的量。 12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其包括：在试剂的存在下在所述第一腔室中孵育所述多个分子，并且确定所述试剂是否影响所述多个分子的再循环。 13.一种确定多个分子的组织渗透率的方法，所述方法包括： a)将所述多个分子引入第一腔室，其中所述第一腔室与第二腔室通过细胞层分隔，并且所述第一腔室和所述第二腔室包含水溶液；其中所述水溶液处于生理pH，并且所述细胞层包含表达介导分子输运的受体的细胞； b)测量从所述第一腔室再循环到所述细胞层并返回到所述第一腔室的所述多个分子的量； c)测量从所述第一腔室转胞吞至所述第二腔室的所述多个分子的量；以及 d)基于转胞吞分子与再循环分子的比率确定所述多个分子的所述组织渗透率。 14.根据权利要求13所述的方法，其中测量再循环的所述多个分子包括：将所述多个分子引入所述第一腔室后，在所述第一腔室中孵育所述多个分子；更换所述第一腔室和所述第二腔室两者中的所述水溶液；以及测量从所述细胞层释放到所述第一腔室中的所述多个分子的量。 15.根据权利要求13或14所述的方法，其中测量转胞吞的所述多个分子包括：将所述多个分子引入所述第一腔室后，在所述第一腔室中孵育所述多个分子；更换所述第一腔室和所述第二腔室两者中的所述水溶液；以及测量从所述细胞层释放到所述第二腔室中的所述多个分子的量。 16.根据权利要求13至15中任一项所述的方法，其中所述细胞层包括细胞单层。 17.根据权利要求13至16中任一项所述的方法，其中介导分子输运的所述受体为转铁蛋白受体、Fc受体、巨蛋白或立方蛋白。 18.根据权利要求13至17中任一项所述的方法，其中介导分子输运的所述受体为新生儿Fc受体(FcRn)。 19.根据权利要求13至18中任一项所述的方法，其中所述细胞为马丁-达比犬肾(MDCK)细胞。 20.根据权利要求13至19中任一项所述的方法，其中测量再循环的所述多个分子的量和测量转胞吞的所述多个分子的量独立地包括使用酶联免疫吸附测定(ELISA)、液体闪烁计数(LSC)、定量PCR、荧光读取器系统、质谱法或其任意组合。 21.根据权利要求13至20中任一项所述的方法，其中所述多个分子为含有Fc的分子。 22.根据权利要求13至21中任一项所述的方法，其中所述多个分子为抗体。 23.根据权利要求22所述的方法，其中所述抗体为抗IgE抗体、抗VEGF抗体、抗整合素抗体、抗IL-6抗体、抗TNFa抗体、抗BACE1抗体或抗gD抗体。 24.根据权利要求13至23中任一项所述的方法，其中所述组织渗透率为脑渗透率。 25.根据权利要求13至24中任一项所述的方法，其包括：在试剂的存在下在所述第一腔室中孵育所述多个分子，并且确定所述试剂是否影响所述多个分子的所述组织渗透率。 26.一种确定多个分子的药代动力学(PK)参数的方法，所述方法包括： a)将所述多个分子引入第一腔室，其中所述第一腔室与第二腔室通过细胞层分隔，并且所述第一腔室和所述第二腔室包含水溶液；其中所述水溶液处于生理pH，并且所述细胞层包含表达介导分子输运的受体的细胞； b)测量从所述第一腔室再循环到所述细胞层并返回到所述第一腔室的所述多个分子的量；以及 c)基于再循环的所述多个分子的量确定所述PK参数。 27.根据权利要求26所述的方法，其中测量再循环的所述多个分子包括：将所述多个分子引入所述第一腔室后，在所述第一腔室中孵育所述多个分子；更换所述第一腔室和所述第二腔室两者中的所述水溶液；以及测量从所述细胞层释放到所述第一腔室中的所述多个分子的量。 28.根据权利要求26或27所述的方法，其中所述细胞层包括细胞单层。 29.根据权利要求26至28中任一项所述的方法，其中所述细胞表达异源FcRn。 30.根据权利要求26至29中任一项所述的方法，其中所述细胞为马丁-达比犬肾(MDCK)细胞。 31.根据权利要求26至29中任一项所述的方法，其中测量再循环的所述多个分子的量包括使用酶联免疫吸附测定(ELISA)、液体闪烁计数(LSC)、定量PCR、荧光读取器系统或质谱法。 32.根据权利要求26至31中任一项所述的方法，其中所述多个分子为含有Fc的分子。 33.根据权利要求26至32中任一项所述的方法，其中所述多个分子为抗体。 34.根据权利要求33所述的方法，其中所述抗体为抗IgE抗体、抗VEGF抗体、抗整合素抗体、抗IL-6抗体、抗TNFa抗体、抗BACE1抗体或抗gD抗体。 35.根据权利要求26至34中任一项所述的方法，其中所述PK参数为所述多个分子的体内清除率、分布体积、曲线下面积(AUC)或体内半衰期的量度。 36.根据权利要求26至35中任一项所述的方法，其包括：在试剂的存在下在所述第一腔室中孵育所述多个分子，并且确定所述试剂是否影响所述多个分子的所述PK参数。 37.一种测定系统，其包括： a)第一腔室和第二腔室，其中每个腔室包含处于生理pH的水溶液； b)细胞层，所述细胞层分隔所述第一腔室和所述第二腔室，其中所述细胞层可以介导分子从所述第一腔室到所述细胞层中，并返回到所述第一腔室中的再循环； c)检测器，其用于检测分子在所述第一腔室中的存在；其中所述测定系统配置成确定多个分子的再循环，其中所述确定包括：将所述多个分子引入所述第一腔室；在所述第一腔室中孵育所述多个分子；更换所述第一腔室和所述第二腔室两者中的所述水溶液；以及测量从所述细胞层释放到所述第一腔室中的所述多个分子的量。 38.根据权利要求37所述的测定系统，其中：所述测定系统进一步包含检测器，所述检测器用于检测分子在所述第二腔室中的存在；所述细胞层可以介导分子从所述第一腔室到所述第二腔室的转胞吞作用；并且其中所述测定系统配置成确定多个分子跨所述细胞层的所述转胞吞作用，其中确定转胞吞作用包括在更换所述水溶液之后，测量所述第二腔室中的所述多个分子的量。 39.根据权利要求37或38所述的测定系统，其中所述第一腔室和所述第二腔室为96孔转运孔板的组件。 40.一种试剂盒，其包括根据权利要求37至39中任一项所述的测定系统和使用说明书。