详情

原文传递利用聚乙烯亚胺定量检测对苯二酚和β-葡萄糖苷酶的方法

专利名称：	利用聚乙烯亚胺定量检测对苯二酚和β-葡萄糖苷酶的方法
摘要：	本发明公开了一种以聚乙烯亚胺定量检测对苯二酚和β‑葡萄糖苷酶的方法。β‑葡萄糖苷酶可水解β‑熊果苷产生对苯二酚，对苯二酚可与超支化聚乙烯亚胺交联并形成水溶性荧光聚合物纳米颗粒，生成荧光聚合物纳米颗粒的荧光强度与对苯二酚的浓度或者参加水解过程中的β‑葡萄糖苷酶的活性成正比，当对苯二酚的浓度在0～2.5μM或者β‑葡萄糖苷酶的浓度在1～36U L‑1范围时，体系在510nm处的荧光强度与对苯二酚的浓度或β‑葡萄糖苷酶活性呈良好的线性关系，进而可利用聚乙烯亚胺实现对于对苯二酚及β‑葡萄糖苷酶活性的定量检测。该方法操作简单，检测限低，灵敏度高，选择性好，能快速实时的对β‑葡萄糖苷酶的活性进行定量检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	安徽;34
申请人：	安徽师范大学
发明人：	台德艳;鲍慧娟;刘金水
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-30T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201910696034.1
公开号：	CN110398482A
代理机构：	芜湖安汇知识产权代理有限公司
代理人：	尹婷婷
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	241000 安徽省芜湖市弋江区花津南路安徽师范大学
主权项：	1.聚乙烯亚胺在定量检测对苯二酚和β-葡萄糖苷酶中的应用。 2.一种对苯二酚的定量检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤： (1)向聚乙烯亚胺溶液和磷酸盐缓冲溶液的混合液中，加入一系列不同浓度的对苯二酚溶液，反应之后，在373nm的激发波长下检测体系的荧光光谱； (2)以对苯二酚溶液的浓度为横坐标，体系在510nm波长处的荧光强度为纵坐标构建标准曲线，进而定量检测出对苯二酚的浓度。 3.根据权利要求2所述的对苯二酚的定量检测方法，其特征在于，步骤(1)中，聚乙烯亚胺溶液、磷酸盐缓冲溶液的终浓度分别为0.29g/L～0.37g/L、18mM～22mM；所述磷酸盐缓冲溶液的pH为8.0～10.0。 4.根据权利要求2所述的对苯二酚的定量检测方法，其特征在于，步骤(1)中，对苯二酚溶液的终浓度分别为0、0.05、0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8、2.1，2.4、2.7、3.0、3.3、3.6、3.9、4.2、4.5、6.5、9.0、12.0、15.0μM。 5.根据权利要求2所述的对苯二酚的定量检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述反应的条件为55～65℃反应85～95分钟。 6.一种β-葡萄糖苷酶活性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤： A、分别使用不同浓度的β-葡萄糖苷酶水解β-熊果苷，得到水解液； B、向聚乙烯亚胺溶液和磷酸盐缓冲溶液的混合液中，分别加入步骤A得到的水解液，孵育之后，在373nm的激发波长下检测体系的荧光光谱； C、以β-葡萄糖苷酶的浓度为横坐标，体系在510nm波长处的荧光强度为纵坐标构建标准曲线，进而定量检测出β-葡萄糖苷酶的活性。 7.根据权利要求6所述的β-葡萄糖苷酶活性的检测方法，其特征在于，β-熊果苷、聚乙烯亚胺溶液的终浓度分别为47μM～53μM、0.29g/L～0.37g/L。 8.根据权利要求6所述的β-葡萄糖苷酶活性的检测方法，其特征在于，所述步骤A具体包括以下步骤：将100μL、1.0mMβ-熊果苷溶液与100μL的pH＝6.5的40mM磷酸盐缓冲液混合，然后向混合物中加入500μL不同浓度的β-葡萄糖苷酶，以使体系中β-葡萄糖苷酶的终浓度分别为0、1、3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45、50、60、70、80、90、100UL-1。 9.根据权利要求6-8任意一项所述的β-葡萄糖苷酶活性的检测方法，其特征在于，所述步骤B中，所述磷酸盐缓冲溶液的pH为8.0～10.0。 10.根据权利要求6-8任意一项所述的β-葡萄糖苷酶活性的检测方法，其特征在于，所述步骤B中，孵育的条件为：55～65℃反应85～95分钟。
所属类别：	发明专利