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原文传递针对丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B-raf(BRAF)的SRM/MRM测定

专利名称：	针对丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B-raf(BRAF)的SRM/MRM测定
摘要：	本发明提供了来自丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B‑raf(BRAF)的具体的肽和这些肽的衍生电离特性，其特别有利于通过选择反应监测(SRM)质谱或也可称作多反应监测(MRM)质谱的方法直接定量已经在福尔马林中固定的生物样品中的BRAF蛋白质。这类生物样品是经化学保藏和固定的，该生物样品选自使用含有试剂/固定剂的甲醛处理的组织和细胞，包括福尔马林固定的组织/细胞、福尔马林固定/石蜡包埋(FFPE)的组织/细胞、FFPE组织块和来自那些块的细胞，以及经福尔马林固定和或石蜡包埋的组织培养细胞。使用Liquid Tissue试剂和方案从该生物样品中制备蛋白质样品并通过在蛋白质样品中定量至少一种或多种所描述的肽来使用SRM/MRM质谱的方法在Liquid Tissue样品中定量BRAF蛋白质。这些肽在其以修饰的或未修饰的形式存在时可被定量。BRAF肽的修饰的形式的一个示例是肽序列内酪氨酸、苏氨酸、丝氨酸和/或其他氨基酸残基的磷酸化。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	美国;US
申请人：	爱科谱迅病理研究公司
发明人：	大卫·B·克里茨曼;托德·哈姆布拉夫;史诺·塞帕洛姆比尔;辽卫礼
专利状态：	有效
申请日期：	2015-07-13T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-05T00:00:00+0800
申请号：	CN201910658572.1
公开号：	CN110412288A
代理机构：	北京润平知识产权代理有限公司
代理人：	刘依云;乔雪微
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	美国马里兰州
主权项：	1.一种用于检测和定量蛋白质消化物中的BRAF片段肽的含量的试剂在制备用于测量福尔马林固定组织的生物样品中BRAF酪氨酸激酶受体蛋白质BRAF水平的试剂中的应用，其中所述片段肽为如选自以下组成的组中的一种氨基酸序列SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ IDNO:10和SEQ ID NO:11所示的肽，且其中所述BRAF片段肽的含量使用质谱进行检测和定量；且其中所述水平是相对水平或绝对水平。 2.权利要求1所述的应用，其中，在检测和定量所述BRAF片段肽的含量之前对所述蛋白质消化物进行分级。 3.权利要求2所述的应用，其中所述分级的步骤选自液相色谱、纳米反相液相色谱、高效液相色谱或反相高效液相色谱。 4.权利要求1-3中任一项所述的应用，其中所述蛋白质消化物包括蛋白酶消化物。 5.权利要求4所述的应用，其中所述蛋白质消化物包括胰蛋白酶消化物。 6.权利要求1-3中任一项所述的应用，其中所述质谱包括串联质谱、离子阱质谱、三重四极质谱、MALDI-TOF质谱、MALDI质谱和/或飞行时间质谱。 7.权利要求6所述的应用，其中使用的质谱模式是选择反应监测SRM、多反应监测MRM和/或多选择反应监测mSRM。 8.权利要求1-3中任一项所述的应用，其中所述组织是石蜡包埋的组织。 9.权利要求1-3中任一项所述的应用，其中所述组织获自肿瘤。 10.权利要求1-3中任一项所述的应用，其中定量所述BRAF片段肽水平包括比较一种生物样品中BRAF片段肽的含量与不同且单独的生物样品中相同BRAF片段肽的含量。 11.权利要求1-3中任一项所述的应用，其中定量BRAF片段肽水平包括通过与已知含量的添加的内标肽相比较来确定生物样品中所述BRAF片段肽的含量，其中所述生物样品中所述BRAF片段肽的含量与具有相同氨基酸序列的内标肽相比较。 12.权利要求11所述的应用，其中所述内标肽是同位素标记的肽。 13.权利要求12所述的应用，其中所述同位素标记的内标肽包含选自18O、17O、34S、15N、13C、2H和其组合的一种或多种重稳定同位素。
所属类别：	发明专利