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原文传递犬副流感病毒单克隆抗体及其应用

专利名称：	犬副流感病毒单克隆抗体及其应用
摘要：	本发明涉及犬副流感病毒的鼠单克隆抗体2B7和4H1，该单克隆抗体的可变区序列能特异性、保守性地结合犬副流感病毒。其作为抗体对制备的胶体金检测试剂盒能高灵敏度的检测多种犬副流感病毒流行株和标准株，与RT‑PCR检测方法符合率高，能满足现阶段临床上的迫切需求。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	洛阳普莱柯万泰生物技术有限公司
发明人：	田克恭;郝丽影
专利状态：	有效
申请日期：	2018-04-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-05T00:00:00+0800
申请号：	CN201810401168.1
公开号：	CN110412267A
代理机构：	北京华夏正合知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	韩登营
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	471003 河南省洛阳市高新区华夏路
主权项：	1.一种特异性结合犬副流感病毒的鼠单克隆抗体2B7的可变区序列，其中，1)重链可变区氨基酸序列为SEQ ID No.1编码的氨基酸序列或该序列经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；2)轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID No.2编码的氨基酸序列或该序列经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。 2.一种抗体或抗体片段，其中，所述抗体或抗体片段具有权利要求1所述的鼠单克隆抗体2B7的可变区序列，所述抗体或抗体片段能特异地结合犬副流感病毒；优选地，所述抗体为单克隆抗体2B7，所述单克隆抗体2B7重链可变区氨基酸序列为SEQ ID No.1编码的氨基酸序列，其轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID No.2编码的氨基酸序列。 3.一种特异性结合犬副流感病毒的鼠单克隆抗体4H1的可变区序列，其中，1)重链可变区氨基酸序列为SEQ ID No.3编码的氨基酸序列或该序列经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体；2)轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID No.4编码的氨基酸序列或该序列经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。 4.一种抗体或抗体片段，其中，所述抗体或抗体片段具有权利要求3所述的鼠单克隆抗体4H1的可变区序列，所述抗体或其片段能特异地结合犬副流感病毒；优选地，所述抗体为单克隆抗体4H1，所述单克隆抗体4H1重链可变区氨基酸序列为SEQ ID No.3编码的氨基酸序列，其轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID No.4编码的氨基酸序列。 5.一种犬副流感病毒检测试剂盒，所述试剂盒包括有效量的所述单克隆抗体2B7、有效量的金标记所述单克隆抗体4H1，或有效量的所述单克隆抗体4H1、有效量的金标所述单克隆抗体2B7，以及对犬副流感病毒抗原抗体反应进行检测的检测试剂；优选地，所述试剂盒包括有效量的所述单克隆抗体2B7、有效量的金标记所述单克隆抗体4H1，以及对犬副流感病毒抗原抗体反应进行检测的检测试剂，其中，所述试剂盒包括胶体金检测试纸条，所述胶体金检测试纸条包括：底板，所述底板具有第一端和第二端，并且沿所述第一端向第二端的方向上依次有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜与金标垫接触或与样品垫、金标垫接触使得犬副流感病毒抗原与所述单克隆抗体4H1的结合体能在其上向底板第二端迁移；所述金标垫上含有胶体金标记的所述单克隆抗体4H1，所述硝酸纤维素膜上包括检测线和质控线，所述检测线上固定化有所述单克隆抗体2B7，所述质控线上固定化有羊抗鼠多抗或羊抗鼠二抗；其中，所述有效量的所述单克隆抗体2B7含量为1～3mg/ml，所述有效量的所述单克隆抗体4H1胶体金标记时含量为20～150μg/ml，所述羊抗鼠多抗或羊抗鼠二抗含量为2mg/ml；更优选地，所述有效量的单克隆抗体2B7含量为2～3mg/ml，有效量的所述单克隆抗体4H1胶体金标记时含量为50～150μg/ml。 6.根据权利要求5所述的犬副流感病毒检测试剂盒，其中，所述金标垫上含有胶体金标记的所述单克隆抗体4H1和胶体金标记的所述单克隆抗体1G5，所述硝酸纤维素膜上包括固定化有所述单克隆抗体2B7的检测线，还包括固定化有所述单克隆抗体6E11的检测线，有效量的所述单克隆抗体6E11含量为1～3mg/ml，所述有效量的所述单克隆抗体1G5胶体金标记时含量为20～50μg/ml；所述单克隆抗体1G5由保藏号为CCTCC No：C2015201的小鼠骨髓杂交瘤细胞1G5株分泌，所述单克隆抗体6E11由保藏号为CCTCC No：C2015202的小鼠骨髓杂交瘤细胞6E11株分泌。 7.根据权利要求5所述的犬副流感病毒检测试剂盒，其中，所述试剂盒中沿所述第一端向第二端的方向上依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫相邻的部件相互接触，而不相邻的部件之间不接触；所述试剂盒还包括样品处理液，所述样品处理液为磷酸盐缓冲液；优选地，所述样品处理液为pH7.4、0.02mol/L PBS缓冲液。 8.一种小鼠杂交瘤细胞2B7株，所述小鼠杂交瘤细胞2B7株分泌权利要求2所述的单克隆抗体2B7。 9.一种小鼠杂交瘤细胞4H1株，所述小鼠杂交瘤细胞4H1株分泌权利要求4所述的单克隆抗体4H1。 10.根据权利要求5中所述试剂盒的制备方法，其中，所述制备方法包括：步骤1)用胶体金分别标记所述单克隆抗体4H1、为金标抗体，制成金标垫，所述单克隆抗体4H1标记时含量为20～150μg/ml；步骤2)固定所述单克隆抗体2B7、羊抗鼠二抗或羊抗鼠多抗分别吸附于硝酸纤维素膜的一端作为检测线T1、质控线，所述单克隆抗体2B7稀释至1～3mg/ml固定后作为检测线T1，所述羊抗鼠多抗或羊抗鼠二抗为2mg/ml固定后作为质控线；步骤3)配制样品处理液，分装；以及步骤4)将所述步骤1)所制备的金标垫、所述步骤2)所制备的的硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在底板上，裁剪；连同所述步骤3)制备的样品处理液组装成试剂盒；优选地，所述步骤1)用胶体金分别标记所述单克隆抗体4H1、单克隆抗体1G5为金标抗体，制成金标垫，所述单克隆抗体4H1标记时含量为20～150μg/ml、所述单克隆抗体1G5标记时含量为20～50μg/ml；所述步骤2)固定所述单克隆抗体2B7、固定单克隆抗体6E11、羊抗鼠二抗或羊抗鼠多抗分别吸附于硝酸纤维素膜的一端作为检测线T1、检测线T2、质控线，所述单克隆抗体2B7、所述单克隆抗体6E11分别稀释至1～3mg/ml固定后作为检测线T1、T2，所述羊抗鼠多抗或羊抗鼠二抗为2mg/ml固定后作为质控线。
所属类别：	发明专利