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原文传递一种圆斑蝰蛇蛇毒的鉴定方法及其应用

专利名称：	一种圆斑蝰蛇蛇毒的鉴定方法及其应用
摘要：	本发明公开了一种圆斑蝰蛇蛇毒的鉴定方法，包括如下步骤：（1）将圆斑蝰蛇毒素冻干粉溶解后配制成蛋白质溶液；（2）进行SDS‑PAGE电泳分析；（3）进行液质联用LC‑MS/MS质谱鉴定。此外，本发明还公开了所述的一种圆斑蝰蛇蛇毒的鉴定方法在制备治疗蝰蛇毒中毒的抗蝰蛇毒血清中的应用。本发明可对蝰蛇毒进行实验室鉴定，更准确地对蝰蛇毒进行质控，一方面能够保证治疗蝰蛇毒中毒的特效抗蝰蛇毒血清安全有效、质量可控，对毒蛇种类鉴别、蛇伤诊断治疗及其他蛇毒应用等方面具有十分重要的意义。本发明方法检测灵敏度高、正确检出率较高、不存在交叉反应，操作过程简单。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海赛伦生物技术股份有限公司
发明人：	陈则;杨智;王德慧;罗敏;李鑫;卞聪华;范铁炯
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-13T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-08T00:00:00+0800
申请号：	CN201910743592.9
公开号：	CN110426522A
代理机构：	上海市汇业律师事务所
代理人：	王函
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	201707 上海市青浦区华青路1288号
主权项：	1.一种圆斑蝰蛇蛇毒的鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将圆斑蝰蛇毒素冻干粉溶解后配制成蛋白质溶液；（2）进行SDS-PAGE电泳分析；（3）进行液质联用LC-MS/MS质谱鉴定。 2. 根据权利要求1所述的一种圆斑蝰蛇蛇毒的鉴定方法，其特征在于，步骤（1）中，所述溶解后配制成蛋白质溶液具体为：用溶液A溶解后配制成蛋白浓度30-60mg/mL的蛋白质溶液；其中，溶液A的配方为：3.2-3.6 mg/mL氯化钠，4.2-4.5 mg/mL硼酸，0.41-0.46 mg/mL四硼酸钠，水；溶液A的pH值为 6.0-8.0。 3. 根据权利要求2所述的一种圆斑蝰蛇蛇毒的鉴定方法，其特征在于，所述溶液A的配方为：3.5mg/mL氯化钠，4.2mg/mL硼酸，0.45mg/mL四硼酸钠，水；溶液A的pH值为 6.8。 4.根据权利要求2所述的一种圆斑蝰蛇蛇毒的鉴定方法，其特征在于，所述用溶液A溶解后配制成蛋白浓度40mg/mL的蛋白质溶液。 5.根据权利要求1所述的一种圆斑蝰蛇蛇毒的鉴定方法，其特征在于，步骤（2）中，所述进行SDS-PAGE电泳分析，蛋白胶浓度为10-17.5%。 6.根据权利要求5所述的一种圆斑蝰蛇蛇毒的鉴定方法，其特征在于，所述蛋白胶浓度为15%。 7. 根据权利要求5或6所述的一种圆斑蝰蛇蛇毒的鉴定方法，其特征在于，步骤（2）中，所述蛋白胶为分离胶，由如下组分组成：水、溶液B、溶液C、溶液D、溶液E、溶液F；所述溶液B的配方为：280-300mg/mL Acrylamide，9-11mg/mL Bis-acrylamid，水；所述溶液C的配方为：181-182 mg/mL Tris，水；溶液C的pH值为7.5-9.5水；所述溶液D的配方为：90-110mg/mLSDS，水；所述溶液E的配方为：90-110 mg/mL APS，水；所述溶液F的配方为：80-100%TEMED溶液。 8. 根据权利要求1所述的一种圆斑蝰蛇蛇毒的鉴定方法，其特征在于，步骤（2）中，所述进行SDS-PAGE电泳分析，蛋白胶浓度为4.5%，所述蛋白胶为浓缩胶，浓度为由如下组分组成：水、溶液B、溶液G、溶液D、溶液E、溶液F；所述溶液B的配方为：280-300 mg/mLAcrylamide，9-11 mg/mL Bis-acrylamide，水；所述溶液G的配方为：110-130 mg/mL Tris，水；溶液G的pH值为6.0-8.0；所述溶液D的配方为：90-110mg/mL SDS，水；所述溶液E的配方为：90-110mg/mL APS，水；所述溶液F的配方为：80-100%TEMED溶液。 9. 根据权利要求1所述的一种圆斑蝰蛇蛇毒的鉴定方法，其特征在于，步骤（2）中，所述进行SDS-PAGE电泳分析后，进行考马斯亮蓝染色，切取相应的蛋白质条带，加少量溶液H覆盖住蛋白条带，所述溶液H的配方为：94 mg/mL甘氨酸，15.1 mg/mL Tris，5 mg/mL SDS，水。 10. 根据权利要求1所述的一种圆斑蝰蛇蛇毒的鉴定方法，其特征在于，步骤（3）中，所述进行液质联用LC-MS/MS质谱鉴定，检测到的蝰蛇蛇毒蛋白主要有磷脂酶A2PLA2 、金属蛋白酶SVMP、丝氨酸蛋白酶SVSP、C-类凝集素蛋白CLPS、L-氨基酸氧化酶LAAO、K-丝氨酸蛋白酶抑制剂KSPI、5'-核苷酸酶5' NUC。 11.如权利要求1-10任一项所述的一种圆斑蝰蛇蛇毒的鉴定方法在制备治疗蝰蛇毒中毒的抗蝰蛇毒血清中的应用。
所属类别：	发明专利