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原文传递一种液相细胞免疫鉴定方法及其应用

专利名称：	一种液相细胞免疫鉴定方法及其应用
摘要：	本发明公开了一种液相细胞免疫鉴定方法及其应用，包括：S1：将血液样本离心，吸取血浆，加入细胞缓冲液，均匀混合细胞，得到血液细胞样本；S2：取肿瘤细胞识别抗体磁珠，加至血液细胞样本中，放于摇床上缓慢转动，室温孵育；S3：将孵育完成的血液细胞样本，瞬时离心后转移至细胞培养板中，将细胞培养板放入磁捕仪中，进行分离和提取活的循环肿瘤细胞；S4：将活的循环肿瘤细胞使用荧光染色或荧光扩增染色和交换试剂液，使循环肿瘤细胞在液体状态中达到标志物染色；S5：液体状态下，免疫荧光鉴定染色后的循环肿瘤细胞。本发明可以对分离提取的活的靶细胞进行细胞定性的荧光免疫鉴定后，液相下，可流动的完整的单个细胞用于后续的各种细胞分析。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	宜昌美光硅谷生命科技股份有限公司
发明人：	邓亚光;许新华;孙长胜;覃程陈;李宴清;邓伟平
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-31T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201910095241.1
公开号：	CN109752530A
代理机构：	北京众达德权知识产权代理有限公司
代理人：	刘杰
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	443005 湖北省宜昌市开发区发展大道大连路33号清华科技园6号楼3楼
主权项：	1.一种液相细胞免疫鉴定方法，其特征在于：包括如下步骤： S1：将血液样本离心，吸取血浆，加入细胞缓冲液，均匀混合细胞，得到血液细胞样本； S2：取肿瘤细胞富集抗体磁珠，加至所述血液细胞样本中，放于摇床上缓慢转动，孵育，使抗体磁珠和靶细胞特异性结合； S3：将所述孵育完成的所述血液细胞样本，瞬时离心后转移至细胞培养板中，将所述细胞培养板放入磁捕仪中，进行无创伤的分离和提取活的循环肿瘤细胞； S4：将细胞培养板中提取到的循环肿瘤细胞，在液相下，使用荧光染色或荧光扩增染色和交换试剂液，使循环肿瘤细胞达到标志物染色； S5：在荧光显微镜下液相观测免疫荧光鉴定染色后的循环肿瘤细胞，并分离提取作后续的细胞分析。 2.根据权利要求1所述液相细胞免疫鉴定方法，其特征在于：所述步骤S1中，细胞缓冲液体积与吸取的血浆体积相同。 3.根据权利要求1所述液相细胞免疫鉴定方法，其特征在于：所述步骤S4中，染色包括如下步骤： (1)从步骤S3磁捕仪中取出培养板，用细胞固定液室温固定分离提取的靶细胞； (2)用靶细胞标志物抗体室温孵育，标记靶细胞； (3)用DAPI试剂，室温孵育标记细胞核； (4)孵育完成后吸弃染色液，沿孔壁缓慢加入细胞缓冲液至释放槽中，恢复细胞在液相状态。 4.根据权利要求3所述液相细胞免疫鉴定方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述抗体包括识别靶细胞的抗体。 5.根据权利要求4所述液相细胞免疫鉴定方法，其特征在于：所述抗体选自识别肿瘤细胞用的角蛋白抗体，识别血细胞用的抗体CD45，以及荧光标记的二级抗体。 6.如权利要求1-5任一项所述液相细胞免疫鉴定方法的应用，其特征在于：将所述免疫荧光鉴定后的靶细胞，分离提取获得单个或经过鉴定的纯靶细胞，直接用于后续的细胞分析包括细胞培养、单细胞或少量纯细胞的基因分析。 7.根据权利要求6所述液相细胞免疫鉴定方法的应用，其特征在于：将所述单个或经过鉴定的纯靶细胞通过蛋白酶处理后，用于细胞培养、单细胞或少量纯细胞的基因分析。 8.根据权利要求6所述液相细胞免疫鉴定方法的应用，其特征在于：所述基因分析包括基因扩增、分析基因表达和基因测序。
所属类别：	发明专利