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一种鉴定、分选、清除衰老细胞的方法和应用
| 专利名称： | 一种鉴定、分选、清除衰老细胞的方法和应用 |
| 摘要： | 本发明公开了一种鉴定、分选、清除衰老细胞的方法和应用。利用免疫荧光、免疫组化或Western blot或定量PCR技术通过检测细胞中的CLDN1鉴定衰老细胞；利用磁珠‑抗体复合物或流式细胞术识别细胞中的CLDN1分选衰老活细胞；将CLDN1 shRNA或siRNA注射到衰老细胞的附近环境中或者衰老细胞内，注射后诱导衰老细胞发生细胞凋亡进而清除衰老细胞。本发明的衰老细胞杀伤手段非常新颖有效，通过基因沉默手段清除衰老细胞对抗衰老药物靶点开发具有重要意义，填补了目前衰老细胞杀伤手段极为有限的空缺。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 申请人： | 浙江大学 |
| 发明人： | 纪俊峰;刘洋;陈祥宁 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 1900-01-20T07:00:00+0805 |
| 发布日期： | 1900-01-20T12:00:00+0805 |
| 申请号： | CN202010014832.4 |
| 公开号： | CN111141904A |
| 代理机构： | 杭州求是专利事务所有限公司 |
| 代理人： | 林超 |
| 分类号： | G01N33/569;G01N33/68;C12N5/071;C12N15/89;G;C;G01;C12;G01N;C12N;G01N33;C12N5;C12N15;G01N33/569;G01N33/68;C12N5/071;C12N15/89 |
| 申请人地址： | 310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘路866号 |
| 主权项： | 1.一种鉴定衰老细胞的方法，其特征在于： 利用免疫荧光、免疫组化或Western blot或定量PCR技术通过检测细胞中的CLDN1鉴定衰老细胞。 2.根据权利要求1所述的一种鉴定衰老细胞的方法，其特征在于：方法包括以下步骤： 1)取人/小鼠组织的石蜡切片、冰冻切片和细胞蛋白裂解液中的一种和如SEQ IDNo.3/SEQ ID No.4的CLDN1抗体共孵育，磷酸盐缓冲液清洗2-3次； 2)用Western blot方法或免疫荧光或免疫组化成像检测步骤1)中CLDN1的表达，若存在CLDN1蛋白的表达，则该细胞为衰老细胞。 3.一种分选衰老细胞的方法，其特征在于：利用磁珠-抗体复合物或流式细胞术识别细胞中的CLDN1分选衰老活细胞。 4.根据权利要求3所述的一种分选衰老细胞的方法，其特征在于：方法包括以下步骤： 1)取如SEQ ID No.3/SEQ ID No.4的CLDN1抗体磁珠复合物或如SEQ ID No.3/SEQ IDNo.4的CLDN1抗体中的一种和人/小鼠组织单细胞悬液共孵育15分钟，磷酸盐缓冲液清洗2-3次； 2)用磁珠分选仪或流式细胞仪分选步骤1)中CLDN1阳性和阴性群体；分选的阳性群体为衰老细胞，阴性群体为年轻细胞。 5.一种清除衰老细胞的方法，其特征在于：利用CLDN1基因沉默清除衰老细胞。 6.根据权利要求4所述的一种清除衰老细胞的方法，其特征在于：方法包括以下步骤：将如SEQ ID No.5-7的CLDN1 shRNA或如SEQ ID No.8-9的siRN注射到衰老细胞的附近环境中或者衰老细胞内，注射后诱导衰老细胞发生细胞凋亡进而清除衰老细胞；其中包含的基因沉默序列为CLDN1基因序列中任一连续的15-25个碱基序列部分，该碱基序列部分仅在CLDN1基因序列中存在，但不存在于除CLDN1以外所有哺乳动物的原始DNA中。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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