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原文传递一种基于铜纳米颗粒的乐果检测试剂盒及检测乐果浓度的方法

专利名称：	一种基于铜纳米颗粒的乐果检测试剂盒及检测乐果浓度的方法
摘要：	一种基于铜纳米颗粒的乐果检测试剂盒及应用该试剂盒检测乐果浓度的方法，属于生物传感器技术领域。我们通过在琼脂糖水凝胶中嵌入铜纳米颗粒，构建了一种基于水凝胶的便携式试剂盒。为了准确定量，本发明用智能手机的高分辨率相机记录了在便携式试剂盒上的荧光颜色变化，其机理是当在检测体系中引入农药乐果时，会抑制脲酶催化尿素产生氨，当乐果浓度增加时，引入农药乐果时，农药抑制脲酶导致脲酶催化尿素产生的氨减少，氨刻蚀铜纳米颗粒产生铜簇的量减少。铜簇具有荧光效应，根据不同浓度量的农药导致荧光强度的不同，造成试剂盒的颜色变化，然后利用ImageJ软件将对应的图像转换成数字信息，图像与乐果浓度对数呈线性关系，从而可以进行定量检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	吉林;22
申请人：	吉林大学
发明人：	卢革宇;孔德帅;闫旭;刘方猛;刘晓敏;孙鹏;高原;梁喜双;刘凤敏
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-15T00:00:00+0800
申请号：	CN201910747364.9
公开号：	CN110455759A
代理机构：	长春吉大专利代理有限责任公司
代理人：	刘世纯;王恩远
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	130012吉林省长春市前进大街2699号
主权项：	1.一种基于铜纳米颗粒的乐果检测试剂盒检测乐果浓度的方法，其步骤如下： (1)将0.8～1.2mL、80～100mmolL-1的Cu(NO3)2水溶液在剧烈搅拌下滴加到8～10mL、80～100mmol L-1的抗坏血酸水溶液中，将得到的混合物在室温下搅拌50～70分钟，静止10～20小时，获得铜纳米颗粒溶液； (2)在100℃下，将5～10mg的琼脂糖溶解在装有0.3～0.4mL水的离心管中，得到琼脂糖水凝胶；将800～900μL步骤(1)中生成的铜纳米颗粒溶液和200～250μL、20～40mmol L-1氢氧化钠水溶液在100℃下添加到上述琼脂糖水凝胶中；待反应体系温度降到50～60℃时，搅拌使反应物混合均匀，得到琼脂糖混合溶液；然后将10份体积为150～200μL的琼脂糖混合溶液分别添加到96孔酶标板的10个孔中，等温度降到室温，96孔酶标板中的琼脂糖混合溶液自然凝固，从而得到了铜纳米颗粒试剂盒，室温下储存； (3)将20～30μL、浓度分别为0.001、0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.5、1、2和5mgL-1的乐果水溶液加入到45～55μL、9～11U mL-1脲酶水溶液中抑制25～35分钟，然后再将100～150μL、9～11mmolL-1尿素加入到乐果和脲酶的混合液中，混合10～20分钟；最后，将10份与步骤(2)中琼脂糖混合溶液等体积的尿素、乐果和脲酶混合溶液添加到步骤(2)得到的盛有琼脂糖混合溶液的96孔酶标板的对应孔中，反应10～15分钟；在365nm紫外线的照射下，将10个孔中琼脂糖水凝胶的颜色通过智能手机拍摄的图片导入ImageJ程序，点击Analyze→Gels→Plot lanes→Analyze→Measure，将试剂盒的图像信息转换为色相参数即强度；再通过origin软件拟合得到线性标准曲线，其中横坐标是乐果浓度的对数，纵坐标是试剂盒颜色所对应的强度； (4)将20～30μL、浓度未知的乐果水溶液加入到45～55μL、9～11U mL-1脲酶水溶液中抑制25～35分钟，然后再将100～150μL、9～11mmolL-1尿素加入到乐果和脲酶的混合液中，混合10～20分钟；最后，将与步骤(2)中琼脂糖混合溶液等体积的尿素、乐果和脲酶混合溶液添加到步骤(2)得到的盛有琼脂糖混合溶液的96孔酶标板的对应孔中，反应10～15分钟；在365nm紫外线的照射下，将琼脂糖水凝胶的颜色通过智能手机拍摄后的图片导入ImageJ程序，点击Analyze→Gels→Plot lanes→Analyze→Measure，将试剂盒的图像信息转换为色相参数即强度；再将强度数据代入步骤(3)得到的标准曲线中，从而计算得到乐果水溶液的浓度。 2.一种基于铜纳米颗粒的乐果检测试剂盒，其特征在于：是由如下步骤制备得到， (1)将0.8～1.2mL、80～100mmolL-1的Cu(NO3)2水溶液在剧烈搅拌下滴加到8～10mL、80～100mmol L-1的抗坏血酸水溶液中，将得到的混合物在室温下搅拌50～70分钟，静止10～20小时，获得铜纳米颗粒溶液； (2)在100℃下，将5～10mg的琼脂糖溶解在装有0.3～0.4mL水的离心管中，得到琼脂糖水凝胶；将800～900μL步骤(1)中生成的铜纳米颗粒溶液和200～250μL、20～40mmol L-1氢氧化钠水溶液在100℃下添加到上述琼脂糖水凝胶中；待反应体系温度降到50～60℃时，搅拌使反应物混合均匀，得到琼脂糖混合溶液；然后将10份体积为150～200μL的琼脂糖混合溶液分别添加到96孔酶标板的10个孔中，等温度降到室温，96孔酶标板中的琼脂糖混合溶液自然凝固，从而得到了铜纳米颗粒试剂盒，室温下储存。
所属类别：	发明专利