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原文传递裂叶独活醇提取液中香豆素类成分的分析和鉴定方法

专利名称：	裂叶独活醇提取液中香豆素类成分的分析和鉴定方法
摘要：	本发明提供裂叶独活醇提取液中香豆素类成分的分析和鉴定方法，属于化学成分分析技术领域。步骤为S1：采用乙醇加热超声提取的方法提取裂叶独活药材中的有效成分，制得裂叶独活供试品溶液；称取香豆素类标准品，配制成标准品溶液；S2：将供试品溶液和标准品溶液采用超高效液相色谱‑四极杆‑飞行时间质谱方法进行检测；S3：采用PeakView1.2软件对质谱的数据进行分析，通过数据库快速筛查和二级质谱分析，从裂叶独活醇提取液快速鉴定多种香豆素类成分。本发明从裂叶独活中共分离和鉴定出32个香豆素类化合物，实现了裂叶独活香豆素较为全面和系统的分析，为香豆素类成分定性分析和裂叶独活药理研究提供基础。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江西;36
申请人：	江西中医药大学
发明人：	严志宏;邓敏芝;蔡瑛;袁恩;周立分;顿珠次仁;刘苗苗
专利状态：	有效
申请日期：	2019-10-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-15T00:00:00+0800
申请号：	CN201910971194.2
公开号：	CN110455964A
代理机构：	南宁新途专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	但玉梅
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	330004江西省南昌市湾里区兴湾大道818号
主权项：	1.裂叶独活醇提取液中香豆素类成分的分析和鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤： S1：采用乙醇加热超声提取的方法提取裂叶独活药材中的有效成分，制得裂叶独活供试品溶液；称取香豆素类标准品，配制成标准品溶液； S2：将供试品溶液和标准品溶液采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱方法进行检测； S3：采用PeakView1.2软件对质谱的数据进行分析，通过数据库快速筛查和二级质谱分析，从裂叶独活醇提取液快速鉴定多种香豆素类成分。 2.根据权利要求1所述的裂叶独活醇提取液中香豆素类成分的分析和鉴定方法，其特征在于，所述步骤S1中的具体做法为： S1.1供试品贮备液的制备：将裂叶独活药材粉碎过80-120目筛，精密称取5g，按照固液比为1:10-12用体积浓度为70%的乙醇溶液浸泡20min-60min，然后加热至45-50℃，利用超声提取1-2h，随后过滤取滤液；将滤渣重复上述操作，合并2次滤液，浓缩至无醇味，得浸膏；将浸膏用体积浓度为50%甲醇溶液定容至25mL，得供试品贮备液，4℃贮存备用； S1.2标准品贮备液的制备：精密称取补骨脂素、东莨菪内酯、佛手柑内酯、欧前胡素、蛇床子素、氧化前胡素、二氢欧山芹醇当归酸酯七种标准品各1mg，分别加入5mL体积浓度为50%的甲醇溶解，制得质量浓度为200μg/mL标准品贮备液，4℃贮存备用； S1.3供试品溶液和标准品溶液的准备：取上述供试品贮备液和标准品贮备液各1mL，分别转移至2mL离心管内，放入低温高速离心机以13000r·min-1离心8-15min，离心后分别取0.5mL上清液于1.5mL的进样瓶内，即得裂叶独活供试品溶液和标准品溶液。 3.根据权利要求1所述的裂叶独活醇提取液中香豆素类成分的分析和鉴定方法，其特征在于，所述步骤S2中，采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱方法分别对裂叶独活供试品溶液和标准品溶液进行检测，测定条件如下：色谱条件：色谱柱规格为2.1×100mm，1.7μm；柱温40℃，进样量4μL，流速0.25mL/min；以0.1%甲酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B进行梯度洗脱，洗脱的程序为：0～10min，5%～15%B；10～20min，15%～25%B；20～30min，25%～45%B；30～32min，45%～47%B；32～35min，47%B；35～40min，47%～50%B；40～45min，50%～55%B；45～50min，55%～95%B ；50～52min，95%B；52～52.1min，95%～5%B； 52.1～55min，5%B；质谱条件：采用ESI电喷雾离子源，正离子模式检测；质量扫描范围m/z100～1000，喷雾电压5.5kV，离子源温度500℃，去簇电压100 eV，碰撞能量45eV，碰撞能量叠加15eV，气帘气压力40psi，雾化气和辅助气压力均为50psi，数据采集时间55min，采用 TOF-MS-IDA-MS/MS方式采集数据，IDA设置响应值超过100cps的6个最高峰进行二级质谱扫描，子离子扫描范围m/z：50～1000，满足该条件的优先进行二级扫描，开启动态背景扣除；获得化合物的总离子流图、一级质谱信息和二级质谱信息。 4.根据权利要求1所述的裂叶独活醇提取液中香豆素类成分的分析和鉴定方法，其特征在于，所述步骤S3中，通过数据库快速筛查和二级质谱分析，从裂叶独活醇提取液快速鉴定多种香豆素类成分的具体方法为：采用PeakView1.2软件对质谱的数据进行分析；根据国内外专业数据库Pubmed，ChemSpider，Metlin，中科院化学专业数据库及国内外裂叶独活及香豆素相关研究文献，收集香豆素类化合物名称、分子式及二级碎片信息，初步建立裂叶独活香豆素类化学成分数据库，结合软件XIC Manager的功能，初步筛选出质量偏差小于5× 10-6的香豆素成分，然后将筛选出的成分进一步与对照品和文献中二级碎片比较，从裂叶独活醇提物中共鉴定和推测出多种香豆素类化合物。
所属类别：	发明专利